How to identify Streptococcus pneumoniae?

Streptococcus pneumoniae (pneumococci) is a part of the normal nasopharyngeal and oropharyngeal flora. It is an important etiological agent of upper and lower respiratory tract infections (URTI and LRTI), bacteremia and septicemia. Streptococcus pneumoniae is also associated with otitis media, sinusitis, meningitis and endocarditis.

pneumokocker är grampositiva lansettformade diplokocker (intracellulärt eller extracellulärt), icke-rörliga och inkapslade. De förekommer i par med den bredare änden motsatt, Därför kallade Gram-positiva diplokocker. S. pneumoniae är en kräsen bakterie, som växer bäst på vid 35-37 C C med ~5% CO2 (eller i en ljusstråle).

laboratoriediagnostik

laboratoriediagnostik av Streptococcus pneumoniae-infektion är baserad på att hitta egenskaper organismens form i sputum, karakteristisk kolonimorfologi, biokemiska reaktioner, mottaglighet för vissa diagnostiska skivor och latexagglutinationstest.

kultur och identifiering under misstänkt Streptococcus pneumoniae-infektion

1. Microscopy and Staining

• Perform Gram staining of the sample (sputum/CSF)
• Gram staining shows Gram positive lanceolate shaped diplococci

Culture and Sensitivity

• 

• Inoculate sample onto blood agar and chocolate agar plate.
• inkubera vid 37 kcal C med 5-10% CO2 i 24 – 48 timmar.

Kolonimorfologi

• kolonier på blodagarplattan är små (0,5 mm), runda, transluscenta eller mukoida med alfa-hemolys (en grön missfärgning av agar runt kolonierna). Alfa-hemolytisk egenskap skiljer S. pneumoniae från många arter, men inte från de kommensala alfa-hemolytiska (viridans) streptokockerna.
• Unga alfa-hemolytiska kolonier verkar upphöjda, och i 24 – 48 timmar är kolonierna platta med deprimerat centrum och kallas draghtsman colony. Det beror på partiell autolys (dessa kolonier identifieras preliminärt som pneumokocker).
• Streptococcus viridans producerar också alfa-hemolytiska kolonier men producerar inte draughstman koloni.

Alfa-hemolytiska kolonier identifieras vidare genom följande bekräftande tester.

identifiering av Streptococcus pneumoniae genom biokemiska reaktioner.

A. Optochin-test (6 mm skiva med 5 occurg).

• inokulera blodagarplatta med misstänkta alfa-hemolytiska isolat.
• applicera kommersiellt tillgängliga optochin-skivor på den strimmiga blodagarplattan
• inkubera plattor vid 37 kcal C med 5-10% CO2 i 18-24 timmar.

Observera zonen för tillväxthämning runt skivan och tolka som:

• en zonstorlek > 14mm indikerar känslighet som är diagnostisk för Streptococcus pneumoniae.
• alfa-hemolytiska kolonier med inhiberingszon mellan 9 och 13 mm bör testas för galllöslighet.

B. Galllöslighetstest.

• alfa-hemolytiska kolonier som visar inhiberingszon runt optochinskiva mellan 9 och 13 mm bör testas för galllöslighet.
• Förbered 1,0 ml saltlösning av organismen från blodagarplattan. Suspensionens grumlighet bör motsvara 0,5 McFarland-standarden.
  

  

• inokulera 0,5 ml av suspensionen i två rör.
• tillsätt en lika stor mängd (0, 5 ml) 2% natriumdeoxikolat i ett rör märkt som test och 0, 5 ml saltlösning i det andra röret märkt som kontroll.
• skaka försiktigt och inkubera rören vid 37 kcal C i 2 timmar.

läsning

• positiv reaktion: Clearing av röret eller förlust i grumlighet i närvaro av deoxikolat på grund av störning av celler.
• negativ reaktion: persistens av grumlighet.

Obs: Detta test kan också göras direkt på kolonin och kolonin lyseras genom tillsats av galllösning.

tolkning av Optochin och Galllöslighetstest

• Zoninhibering av tillväxt runt optochin 14mm är definitivt pneumokocker.
• en bestämd inhiberingszon runt optochinskiva < 14 mm och om isolatet är galllösligt betraktas isolatet som Streptococcus pneumoniae (om det inte är galllösligt är det inte Streptococcus pneumoniae).Mneomonics: kom ihåg meningen ”Streptococcus pneumoniae är en chef” dvs Galllöslig, Optochinkänslig
• stammar med < 14 mm inhiberingszon för optochin eller ingen zon alls och isolatet är inte galllösligt det är inte pneumokocker. Det är förmodligen Streptococcus viridans.

antimikrobiell känslighet

• utför antimikrobiellt känslighetstest mot en utvald grupp av antimikrobiella medel med diskdiffusionsmetod

rapportering av resultat: Streptococcus pneumoniae isolerade och resistensmönster med testade antibiotika

detektion av antigenet

c-kolhydratantigen av Streptococcus pneumoniae kan detekteras i urinen (Läs:pneumokock Urinantigentestning (UAT): princip, procedur och resultat ) för diagnos av antigenet kan detekteras i urinen (Läs: pneumokock Urinantigentestning (UAT): princip, procedur och resultat) för diagnos av lunginflammation och i CSF för diagnos av pneumokock meningit.