rekombinant yttre ytprotein a (des-Cys1-OspA) från Lyme-sjukdomen spirochete Borrelia burgdorferi: höga produktionsnivåer i Saccharomyces cerevisiae jästkulturer

det rekombinanta yttre ytproteinet A med en n-terminalt stympad form (des-Cys1-OspA) från Lyme-sjukdomen spirochete Borrelia burgdorferi uttrycktes i Saccharomyces cerevisiae vid höga produktionsnivåer. Eftersom den rekombinanta vaccinkandidaten uttryckt i Escherichia coli uppvisar låga produktionsutbyten och rening av lipoproteiner verkar vara svår, har vi undersökt utsöndringen av en löslig rekombinant OspA i jäst S. cerevisiae. På detta sätt användes ett Leu+ – derivat av S. cerevisiae cI3ABYS86 som värdstammen transformerad med en uttrycksplasmid innehållande genen som kodar des-Cys1-OspA och drivs av MF alfa 1-promotorn. Fed-batchkulturresultaten avslöjade att en effektiv utsöndring av des-Cys1-OspA erhålls med en hög produktionsnivå på cirka 2.1 g l – 1 vid en celldensitet av 101 g l-1 cell torrvikt. Ackumuleringen av rekombinant protein i supernatanten överstiger 6% av de totala jästproteinerna när de uppskattas med natriumdodecylsulfat/polyakrylamidgelelektrofores. Dessutom visade des-Cys1-OspA lägre lösligheter vid höga celltätheter och som en konsekvens utfälldes en bråkdel av det rekombinanta proteinet. En intern klyvning av MF alpha 1 pro::des-Cys1-OspA-föregångaren detekterades också. I detta fall inträffade emellertid klyvningen med en frekvens så att de stora mängderna av den utsöndrade des-Cys1-OspA kunde användas för utvärdering av en immunogen effekt på djurimmunisering. Dessa studier kommer att utöka kunskapen om användbarheten av OspA som ett vaccin mot Lyme borreliosis.