How to identify Streptococcus pneumoniae?

Streptococcus pneumoniae (pneumococci) is a part of the normal nasopharyngeal and oropharyngeal flora. It is an important etiological agent of upper and lower respiratory tract infections (URTI and LRTI), bacteremia and septicemia. Streptococcus pneumoniae is also associated with otitis media, sinusitis, meningitis and endocarditis.

Pneumokoky jsou Gram pozitivní lancet ve tvaru diplokoky (intracelulárně nebo extracelulárně), non-pohyblivé a zapouzdřené. Vyskytují se ve dvojicích s širším koncem, tedy tzv. grampozitivními diplokoky. S. pneumoniae je náročná bakterie, která roste nejlépe při 35-37°C s ~5% CO2 (nebo ve svíčce).

Laboratorní diagnostika

Laboratorní diagnostika Streptococcus pneumoniae, infekce je založena na zjištění charakteristiky tvaru organismu ve sputu, charakteristické morfologie kolonie, biochemické reakce, náchylnost k určité diagnostické disky a latex aglutinační test.

Kultury a identifikace při podezření Streptococcus pneumoniae, infekce,

1. Microscopy and Staining

• Perform Gram staining of the sample (sputum/CSF)
• Gram staining shows Gram positive lanceolate shaped diplococci

Culture and Sensitivity

• 

• Inoculate sample onto blood agar and chocolate agar plate.
• inkubujte při 37°C s 5-10% CO2 po dobu 24-48 hodin.

morfologie Kolonie

• Kolonií na krevním agaru desky jsou malé (0,5 mm), kulaté, transluscent nebo mukoidní s α-hemolýzy (zelené zbarvení agaru kolem kolonií). Alfa-hemolytická vlastnost odlišuje s. pneumoniae od mnoha druhů, ale ne od komenzálních alfa-hemolytických (viridans) streptokoků.
• mladé alfa-hemolytické kolonie se objevují zvednuté a za 24 – 48 hodin jsou kolonie zploštělé s depresivním středem a nazývají se kreslířská kolonie. Je to způsobeno částečnou autolýzou (tyto kolonie jsou předběžně identifikovány jako pneumokoky).
• Streptococcus viridans také produkuje alfa-hemolytické kolonie, ale neprodukuje kolonii draughstmana.

Alfa-hemolytické kolonie jsou dále identifikovány následující potvrzující testy.

identifikace Streptococcus pneumoniae biochemickými reakcemi.

a. Optochinový test (6 mm disk s 5 µg).

• inokulujte krevní agarovou destičku s podezřením na alfa-hemolytické izoláty.
• aplikujte komerčně dostupné optochinové disky na pruhované krevní agarové destičky
• inkubujte destičky při 37°C s 5-10% CO2 po dobu 18-24 hodin.

pozorujte zónu inhibice růstu kolem disku a interpretujte jako:

• velikost zóny > 14mm označuje citlivost, která je diagnostická pro Streptococcus pneumoniae.
• alfa-hemolytické kolonie s inhibiční zónou mezi 9 a 13 mm by měly být testovány na rozpustnost ve žluči.

b. test rozpustnosti žluči.

• alfa-hemolytických kolonií ukazuje zóny inhibice kolem optochin kotouč mezi 9 až 13 mm by měly být testovány na rozpustnost žluči.
• připravte 1,0 ml fyziologického roztoku suspenze organismu z krevní agarové destičky. Zákal suspenze by měl být ekvivalentní standardu 0, 5 Mcfarlandu.
  

  

• Očkování 0,5 ml suspenze do dvou zkumavek.
• Přidejte stejné množství (0,5 ml) 2% deoxycholát sodný v jedné zkumavce označené jako test a 0,5 ml fyziologického roztoku do druhé zkumavky, označené jako kontrolní.
• jemně protřepejte a inkubujte zkumavky při 37°C po dobu 2 hodin.

čtení

• pozitivní reakce: Vymazání trubice nebo ztráta zákalu v přítomnosti deoxycholátu v důsledku narušení buněk.
• negativní reakce: přetrvávání zákalu.

Poznámka: Tento test lze provést také přímo na kolonii a kolonie se lyzuje přidáním žlučového roztoku.

interpretace testu Optochinové a žlučové rozpustnosti

• zónová inhibice růstu kolem optochinu 14mm je rozhodně pneumokoky.
• určitý inhibiční zóny kolem optochin disk < 14mm a pokud izolovat je žluč rozpustný, izolovat je považován Streptococcus pneumoniae (ne-Li žluč rozpustný, není Streptococcus pneumoniae).Mneomonics: vzpomeňte si na větu „Streptococcus pneumoniae je ŠÉF“, tj. Žluč Rozpustný, Optochin Citlivé
• Kmeny s < 14 mm zóna inhibice optochin nebo ne zóně a izolovat není žluči rozpustný není Pneumokoky. Je to pravděpodobně Streptococcus viridans.

Antimikrobiální citlivosti

• Provádět antimikrobiální citlivosti testu proti vybrané skupiny antimikrobiálních látek disku-difúzní metoda

Hlášení výsledků: Streptococcus pneumoniae izolován a vzory rezistence s testována antibiotika

Detekce antigenu

C-sacharidů antigenu Streptococcus pneumoniae mohou být detekovány v moči (Přečtěte si:Pneumokokové infekce Močových Antigen Testování (UAT): Princip, Postup a Výsledky ), pro diagnózu zápal plic a v mozkomíšním MOKU pro diagnostiku pneumokoková meningitida.