MRSA Detekce

Meticilin-Rezistentní Staphylococcus aureus (MRSA) Detekce a Identifikace Metody

Klíčové Body,

• Gram +ve kok
• Hroznové jako shluky buněk
• Rezistentní na meticilin a další peniciliny
• Může být také odkazoval se na jako ORSA

Meticilin-rezistentní Staphylococcus aureus (MRSA) byly poprvé oznámeny v brzy 1960, a jsou nyní považovány za významný nemocniční patogen po celém světě. Termín rezistentní na methicilin se historicky používá k popisu rezistence na kteroukoli z této třídy antimikrobiálních látek. Dnes v USA cca. 35% nemocničních kmenů S. aureus jsou rezistentní na meticilin (nebo jiná penicilinová antibiotika), a v posledních letech vzniku vankomycin-rezistentních S. aureus (VRSA), vyvolala další obavy.

Rezistence dochází, když organismus má mecA gen produkující změněné penicilin vázající protein, PBP2a (také známý jako PBP2′), a to buď s MIC oxacilinu 2 mg/l nebo meticilin MIC 4 mg/l.

infikovaní a kolonizovaní pacienti jsou rezervoárem MRSA jak v nemocnicích, tak v komunitě, přičemž přenos je obvykle prostřednictvím kontaktu se zdravotnickými pracovníky.

účinná, rychlá laboratorní diagnostika a testování citlivosti jsou rozhodující při léčbě, léčbě a prevenci infekcí MRSA.

detekční techniky

laboratorní screening MRSA je komplexní rovnováha mezi rychlostí výsledku, citlivostí, specificitou a náklady.

v současné době se většina screeningu provádí metodami založenými na deskách. Průzkumy naznačují, že tato metodická skupina představuje >90% provedených screeningových testů.

stále více se však používá řada alternativních metod, včetně metod založených na vývaru, chromogenních médií, souprav rychlého screeningu, molekulárních testů a automatizovaných systémů. Izolace od screeningových výtěrů může být zdlouhavým postupem vzhledem k počtu „kontaminujících“ organismů, které jsou přítomny ve výtěrech z nesterilních míst.

obohacovací média na bázi vývaru se běžně používají ke zvýšení citlivosti. To je však na úkor rychlosti výsledku. NaCl se obecně přidává do základního vývaru spolu s methicilinem, oxacilinem, cefoxitinem. Indikátorové sloučeniny lze také použít k včasné indikaci přítomnosti MRSA.

pevná agarová média: neexistují žádné univerzální standardizované metody pro screening a izolaci MRSA pomocí pevných agarových médií. Mnoho selektivních médií jsou k dispozici, a tyto spoléhat na inhibitory jako je NaCl a/nebo antibiotik k pomoci výběru, spolu s pH indikátor pro zvýraznění presumptives. Příklady jsou Mannitol Salt Agar obsahující 7% NaCl buď s 4mg/L meticilin nebo 2 mg/L oxacilinu; Screeningový Agar rezistentní na oxacilin s 5,5% NaCl a 2 mg/L oxacilinu; Baird Parker médium s 8 mg/L ciprofloxacinu; Mueller Hinton Agar se 4% NaCl a 6 mg / l oxacilinu. Citlivost při inkubaci 24 hodin je variabilní s inkubací 48 hodin, která je často vyžadována pro přijatelný výsledek.

nedávno vyvinutá chromogenní média kombinují primární růst a selektivitu s diferenciací od koagulázových negativních stafylokoků. Tato média vykazují lepší specifičnost ve srovnání s tradičními médii. Citlivost je také zlepšena, ale vyžaduje inkubaci 48 hodin, aby se dosáhlo >85%.

většina molekulárních metod používaných pro detekci MRSA jsou in-house, se spoléhat na multiplexní PCR primery pro detekci genů specifických pro S. aureus (nuc,fem) a mecA detekci meticilin odpor. Nejvíce jsou vhodné pouze pro použití s čistou kulturou a ne promítání tampony vzhledem k přítomnosti koaguláza negativní stafylokoky nesoucí methicilin rezistentní genem mecA. Novější komerčně dostupné amplifikační testy zaměřené mecA v kombinaci s jinými specifickými znaky, jako jsou koaguláza a ukázaly povzbudivé výsledky,

Existuje řada vývoje s bioluminiscence zejména použití adenylát kinázy (AK), enzym, který se nalézá ve všech buňkách, které produkují ATP z ADP. Měření AK je citlivější než systémy založené na ATP a umožňuje rutinní detekci 50 organismů nebo více ve vzorku. Včasné údaje o výkonu ukazují výsledky ekvivalentní konvenčním metodám kultivace destiček a poskytují výsledky do 5 hodin.

Identifikace/Potvrzení

Tradičně potvrzení S. aureus se provádí pomocí posuvného koaguláza test (clumping faktor) a trubice koaguláza test (volná koaguláza). Pozitivní výsledky testu slide coagulase by měly být potvrzeny testem tube coagulase. Mohou být také použity mediální desky DNase, ale pozitiva vyžadují další potvrzení.

Aglutinace soupravy jsou široce dostupné a mohou být použity k potvrzení S. aureus pomocí detekce bílkovin a clumping faktor, i když některé kmeny MRSA mají nízké hladiny těchto proteinů. Novější soupravy nyní fungují také detekcí povrchového antigenu. Jiné latexové soupravy detekují PBP2a, který se vyskytuje v buněčné membráně a vyžaduje lýzu buněk pro detekci.

k dispozici je široká škála komerčních biochemických souprav, manuálních i automatizovaných. Ty jsou založeny na řadě biochemických testů, které poskytují profil hodnocený podle databází/tabulek. Mnoho automatizovaných systémů kombinuje biochemickou identifikaci s. aureus s panely citlivosti na antibiotika pro potvrzení MRSA.

metody citlivosti na antibiotika

metody testování citlivosti na meticilin a oxacilin jsou rozsáhlé a publikované údaje jsou v rozporu s doporučeními.

neexistuje jediná metoda, která by byla vhodná pro všechny kmeny MRSA. Standardní metody jsou publikovány britskou společností pro antimikrobiální chemoterapii (BSAC) a v USA Institutem klinických laboratorních standardů (CLSI), dříve známým jako NCCLS.

minimální inhibiční koncentrace metodou ředění byla tradičně referenční metodou.

BSAC doporučujeme použití Mueller Hinton nebo Columbia agar s 2% NaCl a 104 cfu/ml inokula inkubovány při 30°C. CLSI doporučujeme Mueller Hinton Agar s 2% NaCl a 104 cfu/ml inokula inkubují při teplotě 33-35°C.

Molekulární metody, které detekují mecA genu výměně MIKROFONU se jako referenční metoda.nejpoužívanější zůstává testování citlivosti na antibiotika pomocí metod difúze disku, ale výsledky jsou ovlivněny řadou faktorů včetně média, koncentrace NaCl, teploty, inokula a testovacího činidla.

řada nedávných studií používajících metodu difúze cefoxitinového disku naznačuje větší spolehlivost než u oxacilinu. Nevyžaduje se žádné speciální médium nebo inkubační teplota a test je méně ovlivněn hyperproducenty penicilinázy.

nejnovější CLSI doplněk (M100-S14) navrhuje použití 30µg cefoxitin disky pomocí zarážky <= 19mm jako orientační rezistence S. aureus k oxacilinu. Mezi další metody založené na médiích patří agar, metody zarážky na bázi vývaru (2 mg/l oxacilinu, 4 mg / L methicilinu) a screeningové metody agaru doporučené CLSI (schválená norma M7-A6).

MRSA již není pouze infekcí, která se získává v nemocnicích, i když to zůstává primárním zdrojem přenosu.

stále více MRSA lze získat v komunitě a skutečně od domácích zvířat . To je možná znepokojivější trend kvůli potenciálně velké hostitelské populaci a zdůrazňuje potřebu výrazně zvýšených kontrol toho, jak a kdy se antibiotika používají.

Rozšířené dodávky antibiotik mimo klinicky významné využití může vést pouze k další výběr organismy rezistentní k vyšší úrovni antibiotik.

definice: co jsou patogeny ESKAPE?

Často označován v médiích jako ‚superbugs, ESKAPE patogeny (Enterococcus faecium, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae, Acinetobacter baumannii, Pseudomonas aeruginosa, Enterobacter spp.) jsou celosvětově považovány za hlavní příčinu infekcí získaných v nemocnici.

Získejte nejnovější aktualizace rychlých mikrobiologických testovacích metod zaslaných na váš e-mail? Přihlaste se k odběru bezplatného rapidmicrobiology eNewsletter