Rekombinantní vnější povrchový protein A (des-Cys1-OspA) z Lyme nemoc spirochéta Borrelia burgdorferi: vysoká úroveň výroby v Saccharomyces cerevisiae kvasinkových kultur

rekombinantní vnější povrchový protein s N-terminálně zkrácené podobě (des-Cys1-OspA) od Lyme nemoc spirochéta Borrelia burgdorferi byl vyjádřen v Saccharomyces cerevisiae při vysoké úrovni výroby. Protože rekombinantní vakcíny kandidáta vyjádřený v Escherichia coli vykazuje nízké výrobní výnosy a čištění lipoproteinů se zdá být obtížné, zkoumali jsme sekreci rozpustné rekombinantní OspA v kvasinkách S. cerevisiae. Tímto způsobem, Leu+ derivát S. cerevisiae cI3ABYS86 byl použit jako hostitelský kmen proměnil s výrazem plasmid obsahující gen kódující des-Cys1-OspA a řízen MF alfa 1 pořadatel. Výsledky kultivace fed-batch odhalily, že účinná sekrece des-Cys1-OspA se získá s vysokou produkční úrovní asi 2.1 g l-1 při hustotě buněk 101 g l-1 suché hmotnosti buněk. Akumulace rekombinantního proteinu v supernatantu přesahuje 6% celkových kvasinkových proteinů, pokud je odhadnuta elektroforézou dodecylsulfátu/polyakrylamidového gelu. Navíc des-Cys1-OspA vykazoval nižší rozpustnost při vysokých hustotách buněk a v důsledku toho se vysrážela frakce rekombinantního proteinu. Bylo také zjištěno vnitřní štěpení prekurzoru MF alpha 1 pro::des-Cys1-OspA. Nicméně, v tomto případě štěpení došlo v četnosti takové, že velké množství vylučované des-Cys1-OspA by mohly být využity pro hodnocení imunogenní účinek na zvíře očkování. Tyto studie rozšíří znalosti o užitečnosti OspA jako vakcíny proti lymské borelióze.