How to identify Streptococcus pneumoniae?

Streptococcus pneumoniae (pneumococci) is a part of the normal nasopharyngeal and oropharyngeal flora. It is an important etiological agent of upper and lower respiratory tract infections (URTI and LRTI), bacteremia and septicemia. Streptococcus pneumoniae is also associated with otitis media, sinusitis, meningitis and endocarditis.

a pneumococcusok Gram-pozitív lancet alakú diplococcusok (intracellulárisan vagy extracellulárisan), nem mozgékonyak és kapszulázottak. Párban fordulnak elő, szemben a szélesebb véggel, ezért Gram-pozitív diplococcusoknak hívják. Az S. pneumoniae egy kényes baktérium, amely a legjobban 35-37 C-nél növekszik ~5% CO2-val (vagy gyertyatartóban).

laboratóriumi diagnózis

laboratóriumi diagnózis Streptococcus pneumoniae fertőzés alapján megállapítás jellemzői alakja a szervezet a köpet, jellegzetes kolónia morfológia, biokémiai reakciók, fogékonyság bizonyos diagnosztikai lemezek és latex agglutinációs teszt.

tenyésztés és azonosítás a feltételezett Streptococcus pneumoniae fertőzés során

1. Microscopy and Staining

• Perform Gram staining of the sample (sputum/CSF)
• Gram staining shows Gram positive lanceolate shaped diplococci

Culture and Sensitivity

• 

• Inoculate sample onto blood agar and chocolate agar plate.
• inkubáljuk 37 CC-n 5-10% CO2-val 24-48 órán keresztül.

kolónia morfológia

• a vér agarlemezen lévő kolóniák kicsiek (0,5 mm), kerekek, transzluscens vagy mucoid alfa-hemolízissel (az agar zöld elszíneződése a telepek körül). Az alfa-hemolitikus tulajdonság megkülönbözteti a S. pneumoniae-t sok fajtól, de nem a kommensális alfa-hemolitikus (viridans) streptococcusoktól.
• fiatal alfa-hemolitikus kolóniák jelennek emelt, és 24-48 óra kolóniák lapított depressziós központ, és az úgynevezett draughtsman kolónia. Ennek oka a részleges autolízis (ezeket a telepeket ideiglenesen Pneumococcusként azonosítják).
• A Streptococcus viridans alfa-hemolitikus kolóniákat is termel, de nem termel draughstman kolóniát.

az alfa-hemolitikus kolóniákat a következő megerősítő tesztekkel azonosítjuk tovább.

A Streptococcus pneumoniae azonosítása biokémiai reakciókkal.

A. Optochin teszt (6 mm-es korong 5 GB-mal).

• oltsuk be a vér agarlemezt feltételezett alfa-hemolitikus izolátumokkal.
• a kereskedelemben kapható optochin lemezeket a csíkos vér agar lemezre kell felhordani
• inkubáljuk a lemezeket 37cl C hőmérsékleten 5-10% CO2-val 18-24 órán keresztül.

figyelje meg a korong körüli növekedési gátlás zónáját, és értelmezze:

• a zóna mérete > 14mm érzékenységet jelez, amely a Streptococcus pneumoniae diagnosztikája.
• a 9 és 13 mm közötti gátlási zónájú alfa-hemolitikus kolóniákat epeoldhatóság szempontjából meg kell vizsgálni.

B. Epeoldhatósági teszt.

• az optochin korong körüli gátlási zónát mutató alfa-hemolitikus kolóniákat 9-13 mm között meg kell vizsgálni epeoldhatóság szempontjából.
• készítsünk 1,0 ml sóoldat szuszpenzió a szervezet vér agar lemez. A szuszpenzió zavarosságának 0,5 McFarland szabványnak kell lennie.
  

  

• a szuszpenzió 0,5 ml-ét oltsuk be két csőbe.
• adjunk hozzá azonos mennyiségű (0,5 ml) 2% – os nátrium-dezoxikolátot az egyik próbaként megjelölt csőbe, és 0,5 ml sóoldatot a kontrollként megjelölt második csőbe.
• óvatosan rázzuk fel és inkubáljuk a csöveket 37 CC-on 2 órán át.

olvasás

• pozitív reakció: A cső tisztítása vagy zavarosság elvesztése deoxikolát jelenlétében a sejtek megzavarása miatt.
• negatív reakció: a zavarosság fennmaradása.

Megjegyzés: Ez a vizsgálat közvetlenül a kolóniára is elvégezhető, és a kolóniát epeoldat hozzáadásával lizálják.

az Optochin és az epe oldhatósági teszt értelmezése

• az optochin 14mm körüli növekedés zóna gátlása határozottan pneumococcusok.
• az optochin disc körül meghatározott gátlási zóna < 14mm, és ha az izolátum epeoldható, akkor az izolátum Streptococcus pneumoniae-nek minősül (ha nem epeoldható, akkor nem Streptococcus pneumoniae).Mneomonics: ne feledje, a mondat” Streptococcus pneumoniae egy BOSS”azaz epe oldható, Optochin érzékeny
• törzsek < 14 mm-es zóna gátlása optochin vagy nincs zóna egyáltalán, és az izolátum nem epeoldható ez nem pneumococcusok. Valószínűleg Streptococcus viridans.

antimikrobiális érzékenység

• végezzen antimikrobiális érzékenységi tesztet az antimikrobiális szerek kiválasztott csoportjával szemben lemezdiffúziós módszerrel

Az eredmények jelentése: Streptococcus pneumoniae izolált és rezisztencia minták tesztelt antibiotikumokkal

az antigén kimutatása

A Streptococcus pneumoniae C-szénhidrát antigénje kimutatható a vizeletben (olvassa el:pneumococcus húgyúti antigén teszt (UAT): elv, eljárás és eredmények ) a Streptococcus pneumoniae a tüdőgyulladás és a CSF diagnózisa a pneumococcus meningitis diagnosztizálására.