MRSA kimutatás

meticillin-rezisztens Staphylococcus aureus (MRSA) kimutatási és azonosítási módszerek

kulcsfontosságú pontok

• Gram +ve coccus
• szőlőszerű sejtcsoportok
• a meticillinnel és más penicillinekkel szemben rezisztens
• ORSA-nak is nevezhetjük

a meticillin-rezisztens Staphylococcus aureust (MRSA) először az 1960-as évek elején jelentették, és ma már világszerte jelentős kórházi kórokozónak tekintik. A meticillinrezisztens kifejezést történelmileg az antimikrobiális szerek ezen osztályának bármelyikével szembeni rezisztencia leírására használják. Ma az USA-ban kb. A S. aureus kórházi törzseinek 35% – a rezisztens a meticillinnel (vagy más penicillin antibiotikumokkal) szemben, és az utóbbi években a vankomicin-rezisztens S. aureus (VRSA) megjelenése további aggodalomra adott okot.

rezisztencia akkor fordul elő, amikor a szervezet mecA génje módosított penicillinkötő fehérjét, PBP2a-t (más néven PBP2′) és vagy 2 mg/l oxacillin MIC-t vagy 4 mg / l meticillin MIC-t termel.

a fertőzött és kolonizált betegek az MRSA tározói mind a kórházakban, mind a közösségben, az átvitel általában az egészségügyi dolgozókkal való érintkezés útján történik.

a hatékony, gyors laboratóriumi diagnózis és érzékenységi vizsgálat kritikus fontosságú az MRSA fertőzések kezelésében, kezelésében és megelőzésében.

kimutatási technikák

az MRSA laboratóriumi szűrése összetett egyensúly az eredmény sebessége, az érzékenység, a specificitás és a költség között.

jelenleg a szűrés nagy részét lemezalapú módszerekkel végzik. Felmérések szerint ez a Módszertani Csoport az elvégzett szűrővizsgálatok >90% – át teszi ki.

azonban egyre több alternatív módszert alkalmaznak, beleértve a húsleves alapú módszereket, a kromogén közegeket, a gyors szűrőkészleteket, a molekuláris vizsgálatokat és az automatizált rendszereket. A szűrővizsgálatoktól való elkülönítés hosszadalmas eljárás lehet a nem steril helyekről származó tamponokban található ‘szennyező’ organizmusok száma miatt.

táptalaj alapú dúsító közeget általában alkalmaznak az érzékenység növelésére. Ez azonban az eredmény sebességének rovására történik. A NaCl-t általában meticillinnel, oxacillinnel, cefoxitinnel együtt adják az alapleveshez. Az indikátorvegyületek felhasználhatók az MRSA jelenlétének korai jelzésére is.

szilárd Agar közeg: nincsenek univerzális szabványosított módszerek az MRSA szűrésére és izolálására szilárd agar közeg alkalmazásával. Számos szelektív táptalaj áll rendelkezésre, és ezek inhibitorokra, például NaCl-ra és/vagy antibiotikumokra támaszkodnak a szelekció elősegítésére, valamint egy pH-mutatóra, amely kiemeli a feltételezéseket. Ilyenek például a mannit só Agar, amely 7% NaCl-t tartalmaz 4 mg / L meticillinnel vagy 2 mg/L oxacillinnel; Oxacillin rezisztens szűrő Agar 5,5% NaCl – lal és 2 mg/L oxacillinnel; Baird Parker táptalaj 8 mg/L ciprofloxacinnal; Mueller Hinton Agar 4% NaCl-lal és 6 mg/L oxacillinnel. A 24 órás inkubáció érzékenysége változó, az elfogadható eredményhez gyakran 48 órás inkubációra van szükség.

a közelmúltban kifejlesztett kromogén közegek kombinálják az elsődleges növekedést és a szelektivitást a koaguláz negatív staphylococcusoktól való megkülönböztetéssel. Ezek a médiumok jobb specifitást mutatnak a hagyományos médiumokhoz képest. Az érzékenység szintén javul, de 48 órás inkubációt igényel a >85% eléréséhez.

az MRSA kimutatására használt molekuláris módszerek többsége házon belüli,multiplexelt PCR primereken alapul, amelyek az S. aureus (nuc, fem) és a mecA meticillinrezisztencia kimutatására szolgáló géneket detektálnak. A legtöbb csak tiszta tenyészetekhez használható, a tamponok szűrése nem a koaguláz-negatív staphylococcusok jelenléte miatt, amelyek a meticillin-rezisztens Meca gént hordozzák. Újabb, kereskedelemben kapható amplifikációs vizsgálatok, amelyek a mecA-t más specifikus markerekkel, például koagulázzal kombinálva célozzák meg, és biztató eredményeket mutattak

számos fejlesztés történt a biolumineszcenciával, különösen az adenilát-kináz (AK) alkalmazásával, amely minden olyan sejtben megtalálható, amely ATP-t termel az ADP-ből. Az AK mérés érzékenyebb, mint az ATP-alapú rendszerek, és lehetővé teszi 50 vagy annál több organizmus rutinszerű kimutatását egy mintában. A korai teljesítményadatok a hagyományos lemeztenyésztési módszerekkel egyenértékű eredményeket mutatnak, miközben 5 órán belül eredményt adnak.

azonosítás/megerősítés

hagyományosan a S. aureus megerősítését a dia koaguláz teszt (csomósodási faktor) és a cső koaguláz teszt (szabad koaguláz) alkalmazásával végezzük. A dia koaguláz teszt pozitív eredményeit a cső koaguláz teszttel kell megerősíteni. A DNAse média lemezek is használhatók, de a pozitív eredmények további megerősítést igényelnek.

agglutinációs készletek széles körben rendelkezésre állnak, és felhasználhatók az S. aureus megerősítésére az a fehérje és a csomósodási faktor kimutatásával, bár az MRSA egyes törzseinek alacsony szintje van ezeknek a fehérjéknek. Az újabb készletek most a felszíni antigén kimutatásával is működnek. Más latex készletek kimutatják a pbp2a-t, amely a sejtmembránon belül fordul elő, és a kimutatáshoz a sejtek lízisét igényli.

kereskedelmi biokémiai készletek széles választéka áll rendelkezésre, mind kézi, mind automatizált módon. Ezek egy sor biokémiai teszten alapulnak, amelyek az adatbázisok/táblázatok alapján értékelt profilt adnak. Számos automatizált rendszer kombinálja az S. aureus biokémiai azonosítását az antibiotikum érzékenységi panelekkel az MRSA megerősítéséhez.

antibiotikum-érzékenységi módszerek

a meticillin-és oxacillin-érzékenységi vizsgálatok módszerei kiterjedtek, és a közzétett adatok ellentmondásosak az ajánlások tekintetében.

nincs egyetlen módszer, amely alkalmas az összes MRSA törzsre. A Standard módszereket a British Society for Antimicrobial Chemotherapy (Bsac), az Egyesült Államokban pedig a Clinical Laboratory Standards Institute (CLSI), korábban NCCLS néven ismert.

a hígítási módszerrel végzett minimális gátló koncentráció hagyományosan a referencia módszer.

a BSAC a Mueller Hinton vagy a Columbia agar alkalmazását javasolja 2% NaCl-lel és 104 cfu/ml-es inokulummal, 30 CC-n inkubálva.a CLSI a Mueller Hinton agart 2% NaCl-lal és 104 cfu/ml-es inokulummal javasolja, 33-35 CC-n inkubálva.

a mecA gént kimutató molekuláris módszerek helyettesítik a mic-t referenciamódszerként.

a legszélesebb körben alkalmazott antibiotikum érzékenységi vizsgálat a korongdiffúziós módszerekkel, de az eredményeket számos tényező befolyásolja, beleértve a tápközeget, a NaCl-koncentrációt, a hőmérsékletet, az inokulumot és a vizsgálati anyagot.

számos, a cefoxitin lemez diffúziós módszerével végzett legújabb tanulmány nagyobb megbízhatóságot sugall, mint az oxacillin esetében. Nincs szükség speciális közeg-vagy inkubációs hőmérsékletre, és a penicillináz hiper-termelői kevésbé befolyásolják a vizsgálatot.

a legújabb CLSI-kiegészítés (M100-S14) 30 a cefoxitin lemezek használata <= 19mm töréspont alkalmazásával jelzi az S. aureus oxacillinnel szembeni rezisztenciáját. Egyéb média alapú módszerek közé tartozik az agar, a húsleves alapú töréspont módszerek (2 mg/l oxacillin, 4 mg/L meticillin) és a CLSI által ajánlott agar szűrési módszerek (jóváhagyott M7-A6 szabvány).

az MRSA már nem csak a kórházakban szerzett fertőzés, bár ez továbbra is elsődleges átviteli forrás.

az MRSA egyre inkább megszerezhető a közösségben, sőt háziállatoktól is . Ez talán az aggasztóbb tendencia a potenciálisan nagy befogadó populáció miatt, és hangsúlyozza, hogy jelentősen meg kell erősíteni az antibiotikumok alkalmazásának módját és idejét.

az antibiotikumok széles körű szállítása a klinikailag jelentős felhasználásokon kívül csak a magasabb szintű antibiotikumokkal szemben ellenálló szervezetek további szelekciójához vezethet.

definíciók: mik azok az ESKAPE kórokozók?

a médiában gyakran superbugs néven említik az ESKAPE kórokozókat (Enterococcus faecium, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae, Acinetobacter baumannii, Pseudomonas aeruginosa, Enterobacter spp.) világszerte a kórházi fertőzések vezető okának tekintik.

kap a legújabb frissítéseket gyors mikrobiológiai vizsgálati módszerek küldött e-mailben? Feliratkozás az ingyenes rapidmicrobiology eNewsletter