rekombináns külső felületi fehérje a (des-Cys1-OspA) a Lyme – kórból spirochete Borrelia burgdorferi: magas termelési szintek a Saccharomyces cerevisiae élesztőtenyészetekben

a rekombináns külső felületi fehérje A N-terminális a Lyme-kór spirochete Borrelia burgdorferi-jéből származó csonka formát (des-cys1-Ospa) Saccharomyces cerevisiae-ben fejezték ki magas termelési szinten. Mivel az Escherichia coli-ban expresszált rekombináns vakcina jelölt alacsony termelési hozamot mutat, és a lipoproteinek tisztítása nehéznek tűnik, megvizsgáltuk az oldható rekombináns OspA kiválasztását az élesztőben S. cerevisiae. Ily módon az S. cerevisiae cI3ABYS86 Leu+ származékát használtuk gazdatörzsként, amelyet a des-Cys1-OspA-t kódoló gént tartalmazó expressziós plazmiddal alakítottak át, és amelyet az MF alfa-1 promoter hajtott végre. A fed-kötegelt tenyésztési eredmények azt mutatták, hogy a des-Cys1-OspA hatékony szekréciója magas termelési szint mellett kb 2.1 g l-1 101 g L-1 sejtsűrűség mellett száraz tömeg. A rekombináns fehérje felhalmozódása a felülúszóban meghaladja az összes élesztőfehérje 6% – át, ha nátrium-dodecil-szulfát/poliakrilamid gélelektroforézissel becsülik. Ezenkívül a des-Cys1-OspA alacsonyabb oldhatóságot mutatott magas sejtsűrűség mellett, és ennek következtében a rekombináns fehérje egy része kicsapódott. Az MF alpha 1 pro::des-Cys1-OspA prekurzor belső hasítását is kimutatták. Ebben az esetben azonban a hasítás olyan gyakorisággal történt, hogy a szekretált des-Cys1-OspA nagy mennyisége felhasználható volt az állatok immunizálására gyakorolt immunogén hatás értékelésére. Ezek a tanulmányok kiterjesztik az OspA Lyme borreliosis elleni oltásként való hasznosságának ismeretét.