How to identify Streptococcus pneumoniae?

Streptococcus pneumoniae (pneumococci) is a part of the normal nasopharyngeal and oropharyngeal flora. It is an important etiological agent of upper and lower respiratory tract infections (URTI and LRTI), bacteremia and septicemia. Streptococcus pneumoniae is also associated with otitis media, sinusitis, meningitis and endocarditis.

I pneumococchi sono diplococchi gram positivi a forma di lancetta (intracellulari o extracellulari), non mobili e incapsulati. Si verificano in coppia con l’estremità più ampia opposta, quindi chiamata diplococchi Gram positivi. S. pneumoniae è un batterio fastidioso, che cresce meglio a 35-37°C con ~ 5% di CO2 (o in un barattolo di candele).

Diagnosi di laboratorio

La diagnosi di laboratorio dell’infezione da Streptococcus pneumoniae si basa sulla ricerca di caratteristiche forma dell’organismo nell’espettorato, morfologia caratteristica della colonia, reazioni biochimiche, suscettibilità a determinati dischi diagnostici e test di agglutinazione al lattice.

la Cultura e l’identificazione durante sospetto di infezione da Streptococcus pneumoniae

1. Microscopy and Staining

• Perform Gram staining of the sample (sputum/CSF)
• Gram staining shows Gram positive lanceolate shaped diplococci

Culture and Sensitivity

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• Inoculate sample onto blood agar and chocolate agar plate.
• Incubare a 37°C con il 5-10% di CO2 per 24-48 ore.

Morfologia delle colonie

• Le colonie sulla piastra di agar del sangue sono piccole (0,5 mm), rotonde, transluscenti o mucoidi con alfa-emolisi (una decolorazione verde dell’agar attorno alle colonie). La proprietà alfa-emolitica differenzia S. pneumoniae da molte specie, ma non dagli streptococchi alfa-emolitici commensali (viridani).
• Le giovani colonie alfa-emolitiche appaiono sollevate, e in 24 – 48 ore le colonie sono appiattite con il centro depresso e si chiama colonia di disegnatori. È dovuto all’autolisi parziale (queste colonie sono identificate provvisoriamente come pneumococchi).
• Streptococcus viridans produce anche colonie alfa-emolitiche ma non produce colonia di draughstman.

Le colonie alfa-emolitiche sono ulteriormente identificate dai seguenti test di conferma.

Identificazione di Streptococcus pneumoniae mediante reazioni biochimiche.

A. Test Optochin (disco da 6 mm con 5µg).

• Inoculare la piastra di agar del sangue con sospetti isolati alfa-emolitici.
• Applicare i dischi optochin disponibili in commercio sulla piastra di agar sangue striato
• Incubare le piastre a 37°C con 5-10% di CO2 per 18-24 ore.

Osservare la zona di inibizione della crescita intorno al disco e interpretare come:

• Una dimensione di zona > 14mm indica la suscettibilità che è diagnostica di Streptococcus pneumoniae.
• le colonie alfa-emolitiche con zona di inibizione compresa tra 9 e 13 mm devono essere testate per la solubilità della bile.

B. Test di solubilità biliare.

• le colonie alfa-emolitiche che mostrano una zona di inibizione intorno al disco di optochin compresa tra 9 e 13 mm devono essere testate per la solubilità della bile.
• Preparare 1,0 ml di sospensione salina dell’organismo dalla piastra di agar del sangue. La torbidità della sospensione dovrebbe essere equivalente a 0,5 McFarland standard.
  

  

• Inoculare 0,5 ml di sospensione in due tubi.
• Aggiungere una quantità uguale (0,5 ml) di desossicolato di sodio al 2% in una provetta contrassegnata come prova e 0,5 ml di soluzione salina nella seconda provetta contrassegnata come controllo.
• Agitare delicatamente e incubare le provette a 37°C per 2 ore.

Lettura

• Reazione positiva: Compensazione del tubo o perdita di torbidità in presenza di desossicolato a causa della rottura delle cellule.
• Reazione negativa: Persistenza della torbidità.

Nota: Questo test può essere eseguito anche direttamente sulla colonia e la colonia viene lisata mediante aggiunta di soluzione biliare.

Interpretazione di Optochin e bile solubilità test

• Zona inibizione della crescita intorno optochin 14mm è sicuramente pneumococchi.
• Una zona di inibizione definita intorno al disco di optochin< 14mm e se l’isolato è solubile in bile, l’isolato è considerato come Streptococcus pneumoniae (se non solubile in bile, non è Streptococcus pneumoniae).Mneomonics: Ricordate la frase “Streptococcus pneumoniae è un BOSS” cioè bile solubile, Optochin sensibili
• Ceppi con < 14 mm zona di inibizione a optochin o nessuna zona a tutti e l’isolato non è bile solubile non è pneumococchi. Probabilmente è Streptococcus viridans.

di suscettibilità Antimicrobica

• Eseguire test di suscettibilità antimicrobica contro un gruppo selezionato di antimicrobici da disco-metodo di diffusione

Creazione di risultati: Streptococcus pneumoniae isolati e modelli di resistenza con antibiotici testati

il Rilevamento dell’antigene

C-carboidrati antigene dello Streptococco pneumoniae può essere rilevato nelle urine (Leggi:Pneumococco Antigene Urinario di Test (UAT): linea di Principio, il Procedimento e Risultati ) per la diagnosi di polmonite e nel CSF per la diagnosi di meningite da pneumococco.