MRSA Rilevamento

Staphylococcus aureus Meticillino-Resistente (MRSA) Il rilevamento e l’Identificazione di Metodi

i Punti Chiave

• Gram +ve cocco
• Uva come grappoli di cellule
• Resistenza alla meticillina e altre penicilline
• Può anche essere definito come ORSA

Staphylococcus aureus Meticillino-resistente (MRSA) sono stati segnalati nei primi anni 1960 e ora sono considerati come un importante ospedale acquistato patogeno in tutto il mondo. Il termine meticillina resistente è storicamente usato per descrivere la resistenza a qualsiasi di questa classe di antimicrobici. Oggi negli Stati Uniti ca. il 35% dei ceppi ospedalieri di S. aureus è resistente alla meticillina (o ad altri antibiotici penicillinici) e negli ultimi anni l’emergere di S. aureus resistente alla vancomicina (VRSA) ha causato ulteriori preoccupazioni.

La resistenza si verifica quando l’organismo ha un gene mecA che produce una proteina legante la penicillina alterata, PBP2a (nota anche come PBP2′) e un MIC di oxacillina di 2 mg/l o un MIC di meticillina di 4 mg / l.

I pazienti infetti e colonizzati sono il serbatoio di MRSA sia negli ospedali che nella comunità con la trasmissione generalmente attraverso il contatto con gli operatori sanitari.

La diagnosi di laboratorio efficace e rapida e i test di suscettibilità sono fondamentali nel trattamento, nella gestione e nella prevenzione delle infezioni da MRSA.

Tecniche di rilevamento

Lo screening di laboratorio per MRSA è un complesso equilibrio tra velocità di risultato, sensibilità, specificità e costo.

Attualmente la maggior parte dello screening viene effettuata utilizzando metodi basati su piastre. Le indagini suggeriscono che questo gruppo metodologico rappresenta>il 90% dei test di screening eseguiti.

Tuttavia, un certo numero di metodi alternativi, tra cui metodi basati su brodo, mezzi cromogenici, kit di screening rapido, saggi molecolari e sistemi automatizzati, sono sempre più utilizzati. L’isolamento dai tamponi di screening può essere una procedura lunga, a causa del numero di organismi “contaminanti” presenti nei tamponi provenienti da siti non sterili.

I mezzi di arricchimento a base di brodo sono comunemente impiegati per aumentare la sensibilità. Comunque questo è a scapito di velocità di risultato. NaCl viene generalmente aggiunto al brodo di base insieme a meticillina, oxacillina, cefoxitina. I composti indicatori possono anche essere utilizzati per fornire un’indicazione precoce della presenza di MRSA.

Supporti agar solidi: non esistono metodi standardizzati universali per lo screening e l’isolamento di MRSA utilizzando supporti agar solidi. Molti mezzi selettivi sono disponibili e questi si basano su inibitori come NaCl e / o antibiotici per aiutare la selezione, insieme a un indicatore di pH per evidenziare i presuntivi. Gli esempi sono l’agar del sale del mannitolo che contiene il 7% di NaCl con meticillina 4mg / L o oxacillina 2mg / L; Agar di screening resistente all’oxacillina con 5,5% di NaCl e 2 mg/L di oxacillina; Mezzo Baird Parker con 8 mg/L di ciprofloxacina; Agar Mueller Hinton con 4% di NaCl e 6 mg/L di oxacillina. La sensibilità all’incubazione 24hrs è variabile con l’incubazione 48hrs richiesta spesso per un risultato accettabile.

I mezzi cromogenici recentemente sviluppati combinano la crescita primaria e la selettività con la differenziazione dagli stafilococchi coagulasi negativi. Questi media mostrano una maggiore specificità rispetto ai media tradizionali. Anche la sensibilità è migliorata, ma richiede 48 ore di incubazione per raggiungere>85%.

La maggior parte dei metodi molecolari utilizzati per la rilevazione di MRSA sono interni, basandosi su primer PCR multiplexati che rilevano geni specifici per S. aureus (nuc,fem) e mecA che rilevano la resistenza alla meticillina. La maggior parte è adatta solo per l’uso con colture pure e non per lo screening di tamponi a causa della presenza di stafilococchi coagulasi negativi che trasportano il gene resistente alla meticillina mecA. Più recenti test di amplificazione disponibili in commercio che mirano a mecA in combinazione con altri marcatori specifici come la coagulasi e hanno mostrato risultati incoraggianti

Ci sono stati una serie di sviluppi con la bioluminescenza, in particolare l’uso di adenilato chinasi (AK), un enzima trovato in tutte le cellule che producono ATP da ADP. La misurazione AK è più sensibile rispetto ai sistemi basati su ATP e consente il rilevamento di routine di 50 organismi o più in un campione. I primi dati sulle prestazioni mostrano risultati equivalenti ai metodi convenzionali di coltura della piastra fornendo risultati entro 5 ore.

Identificazione/Conferma

Tradizionalmente la conferma di S. aureus viene eseguita utilizzando il test della coagulasi in vetrino (fattore di aggregazione) e il test della coagulasi in provetta (coagulasi libera). I positivi al test della coagulasi in vetrino devono essere confermati con il test della coagulasi in provetta. Le piastre di supporto DNase possono anche essere utilizzate, ma i positivi richiedono ulteriori conferme.

I kit di agglutinazione sono ampiamente disponibili e possono essere utilizzati per confermare S. aureus rilevando la proteina A e il fattore di aggregazione, sebbene alcuni ceppi di MRSA abbiano bassi livelli di queste proteine. I kit più recenti ora funzionano rilevando anche l’antigene di superficie. Altri kit in lattice rilevano PBP2a che si verifica all’interno della membrana cellulare e richiede la lisi delle cellule per il rilevamento.

È disponibile una vasta gamma di kit biochimici commerciali, sia manuali che automatizzati. Questi sono basati su una serie di test biochimici che forniscono un profilo valutato rispetto a database/tabelle. Molti sistemi automatizzati combinano l’identificazione biochimica di S. aureus con pannelli di sensibilità agli antibiotici per la conferma dell’MRSA.

Metodi di sensibilità agli antibiotici

I metodi per i test di sensibilità alla meticillina e all’oxacillina sono ampi e i dati pubblicati sono contraddittori per quanto riguarda le raccomandazioni.

Non esiste un singolo metodo adatto a tutti i ceppi MRSA. I metodi standard sono pubblicati dalla British Society for Antimicrobial Chemotherapy (BSAC) e negli Stati Uniti, dal Clinical Laboratory Standards Institute (CLSI), precedentemente noto come NCCLS.

La concentrazione inibitoria minima con il metodo di diluizione è stata tradizionalmente il metodo di riferimento.

BSAC raccomanda l’uso di Mueller Hinton o Columbia agar con 2% NaCl e 104 cfu/ml inoculo incubato a 30°C. CLSI consiglia Mueller Hinton Agar con 2% NaCl e 104 cfu/ml inoculo incubato a 33-35°C.

Metodi molecolari che rilevano il gene mecA stanno sostituendo MIC come metodo di riferimento.

I test di sensibilità agli antibiotici con metodi di diffusione del disco rimangono i più utilizzati, ma i risultati sono influenzati da una serie di fattori tra cui il mezzo, la concentrazione di NaCl, la temperatura, l’inoculo e l’agente di prova.

Un certo numero di studi recenti che utilizzano il metodo di diffusione del disco di cefoxitina suggeriscono una maggiore affidabilità rispetto all’oxacillina. Non è richiesta alcuna temperatura di incubazione o mezzo speciale e il test è meno influenzato dagli iper-produttori di penicillinasi.

Il più recente integratore CLSI (M100-S14) suggerisce l’uso di dischi di cefoxitina da 30µg utilizzando un punto di interruzione di< = 19mm come indicativo della resistenza di S. aureus all’oxacillina. Altri metodi basati sui media includono agar, metodi di breakpoint basati su brodo (oxacillina 2mg / L, meticillina 4mg / L) e metodi di screening agar raccomandati da CLSI (standard approvato M7-A6).

L’MRSA non è più solo un’infezione acquisita negli ospedali, sebbene questa rimanga una fonte primaria di trasmissione.

Sempre più MRSA può essere acquisito nella comunità e in effetti da animali domestici . Questa è forse la tendenza più preoccupante a causa della popolazione ospite potenzialmente numerosa e sottolinea la necessità di un aumento significativo dei controlli su come e quando vengono utilizzati gli antibiotici.

La somministrazione diffusa di antibiotici al di fuori di usi clinicamente significativi può solo portare a un’ulteriore selezione di organismi che resistono a livelli più elevati di antibiotici.

Definizioni: Cosa sono gli agenti patogeni ESKAPE?

Spesso indicati nei media come “superbatteri”, i patogeni ESKAPE (Enterococcus faecium, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae, Acinetobacter baumannii, Pseudomonas aeruginosa, Enterobacter spp.) sono considerati la principale causa di infezioni acquisite in ospedale a livello globale.

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