proteina Ricombinante di superficie esterna A (des-Cys1-OspA) dalla malattia di Lyme spirocheta Borrelia burgdorferi: alti livelli di produzione in Saccharomyces cerevisiae culture

La proteina ricombinante di superficie esterna con Un N-terminale troncato forma (des-Cys1-OspA) la malattia di Lyme spirocheta Borrelia burgdorferi è stata espressa in Saccharomyces cerevisiae ad alti livelli di produzione. Poiché il candidato vaccino ricombinante espresso in Escherichia coli presenta basse rese di produzione e la purificazione delle lipoproteine sembra essere difficile, abbiamo studiato la secrezione di un OspA ricombinante solubile nel lievito S. cerevisiae. In questo modo, un derivato Leu+ di S. cerevisiae cI3ABYS86 è stato utilizzato come ceppo ospite trasformato con un plasmide di espressione contenente il gene che codifica des-Cys1-OspA e guidato dal promotore MF alpha 1. I risultati della coltura fed-batch hanno rivelato che una secrezione efficiente di des-Cys1-OspA è ottenuta con un alto livello di produzione di circa 2.1 g l-1 ad una densità delle cellule di 101 g l-1 peso a secco delle cellule. L’accumulo di proteine ricombinanti nel surnatante supera il 6% delle proteine totali del lievito se stimato mediante elettroforesi su gel di sodio dodecil solfato/poliacrilammide. Inoltre, des-Cys1-OspA ha mostrato solubilità inferiori ad alte densità cellulari e, di conseguenza, una frazione della proteina ricombinante precipitata. È stata anche rilevata una scissione interna del precursore MF alpha 1 pro::des-Cys1-OspA. Tuttavia, in questo caso la scissione si è verificata ad una frequenza tale che le grandi quantità di des-Cys1-OspA secrete potrebbero essere impiegate per la valutazione di un effetto immunogenico sull’immunizzazione animale. Questi studi estenderanno la conoscenza dell’utilità di OspA come vaccino per la borreliosi di Lyme.