How to identify Streptococcus pneumoniae?
Streptococcus pneumoniae (pneumococci) is a part of the normal nasopharyngeal and oropharyngeal flora. It is an important etiological agent of upper and lower respiratory tract infections (URTI and LRTI), bacteremia and septicemia. Streptococcus pneumoniae is also associated with otitis media, sinusitis, meningitis and endocarditis.
実験室診断
肺炎連鎖球菌感染の実験室診断は、喀痰中の生物の特性形状、特徴的なコロニー形態、生化学反応、特定の診断ディスクおよびラ
肺炎連鎖球菌感染の疑い中の培養と同定
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Microscopy and Staining
- Perform Gram staining of the sample (sputum/CSF)
- Gram staining shows Gram positive lanceolate shaped diplococci
Culture and Sensitivity
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Gram positive diplocci: Streptococcus spp - Inoculate sample onto blood agar and chocolate agar plate.
- 37℃で5–10％CO2で24-48時間インキュベートする。
コロニー形態
- 血液寒天プレート上のコロニーは、α溶血（コロニーの周りの寒天の緑色の変色）を伴う小さな（0.5mm）、円形、経血またはムコイドである。 Α溶血特性は、多くの種からS.pneumoniaeを区別するが、共生α溶血性（viridans）連鎖球菌からではない。
- 若いα溶血性コロニーが隆起して現れ、24-48時間でコロニーは落ち込んだ中心で平らになり、ドラフトマンコロニーと呼ばれます。 それは部分的な自己分解によるものである（これらのコロニーは暫定的に肺炎球菌として同定される）。
- Streptococcus viridansはまた、α溶血性コロニーを産生するが、ドラフストマンコロニーを産生しない。
アルファ溶血コロニーは、以下の確認試験によってさらに同定される。
生化学反応による肺炎連鎖球菌の同定。
A.Optochinテスト（6mmディスク5μ g）。
- 血液寒天プレートにα溶血分離株を接種する。
- 市販のoptochinディスクを縞状の血液寒天プレートに塗布する
- プレートを37℃で5-10％のCO2で18-24時間インキュベートする。
ディスクの周りの成長阻害のゾーンを観察し、次のように解釈します:
- ゾーンサイズ>14mmは肺炎連鎖球菌の診断である感受性を示します。
- 9と13mmの間の阻害ゾーンを有するα溶血コロニーは、胆汁溶解性を試験する必要があります。
B.胆汁溶解度試験。
- 9-13mmの間のoptochinディスクの周りの阻害のゾーンを示すα溶血コロニーは、胆汁溶解性を試験する必要があります。
- 血液寒天プレートから生物の生理食塩水懸濁液1.0mlを調製する。 懸濁液の濁度は0.5McFarlandの標準と同等であるべきです。
胆汁溶解度試験：肺炎連鎖球菌コロニーは胆汁によっ2つの管への懸濁液。 - テストとしてマークされた一つのチューブに2％デオキシコール酸ナトリウムの等量（0.5ml）と対照としてマークされた第二のチューブに生理食塩水の0.5mlを
- 優しく振って、チューブを37℃で2時間インキュベートする。
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- l: 細胞の破壊によるデオキシコール酸塩の存在下でのチューブのクリアまたは濁度の損失。
- 否定的な反応：濁りの持続性。注:このテストはまたコロニーに直接することができ、コロニーは胆汁の解決の付加によって溶解します。
Optochinと胆汁溶解度試験の解釈
- optochin14mmの周りの成長のゾーン阻害は間違いなく肺炎球菌です。
- optochinディスクの周りの明確な阻害ゾーン<14mmであり、単離物が胆汁可溶性であれば、単離物は肺炎連鎖球菌とみなされます（胆汁可溶性ではなMneomonics：文を覚えている”肺炎連鎖球菌はボスです”すなわち胆汁可溶性、オプトチン感受性
- 株<14mm optochinに対する阻害ゾーンまたは全くゾーンがなく、単離された胆汁可溶性ではない肺炎球菌ではない。 それはおそらくStreptococcus viridansです。
抗菌感受性
- ディスク拡散法による抗菌剤の選択されたグループに対する抗菌感受性試験を行います
結果の報告：肺炎球菌単離および試験された抗生物質による耐性パターン
抗原の検出
肺炎連鎖球菌のc-炭水化物抗原は、尿中に検出することができます（読み取り：肺炎球菌尿中抗原検査（UAT）：原則、手順および結果）。肺炎球菌性髄膜炎の診断のための肺炎およびcsfの診断。
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