How to identify Streptococcus pneumoniae?

Streptococcus pneumoniae (pneumococci) is a part of the normal nasopharyngeal and oropharyngeal flora. It is an important etiological agent of upper and lower respiratory tract infections (URTI and LRTI), bacteremia and septicemia. Streptococcus pneumoniae is also associated with otitis media, sinusitis, meningitis and endocarditis.

pneumokokker er grampositive lancetformede diplokokker (intracellulært eller ekstracellulært), ikke-bevægelige og indkapslede. De forekommer parvis med den bredere ende modsat, derfor kaldet Gram-positive diplokokker. S. pneumoniae er en kræsen bakterie, der vokser bedst ved 35-37 liter C med ~5% CO2 (eller i en lyskrukke).

laboratoriediagnose

laboratoriediagnose af Streptococcus pneumoniae-infektion er baseret på at finde karakteristika form af organismen i sputum, karakteristisk kolonimorfologi, biokemiske reaktioner, modtagelighed for visse diagnostiske diske og lateks agglutinationstest.

Kultur og identifikation under mistanke om Streptococcus pneumoniae infektion

1. Microscopy and Staining

• Perform Gram staining of the sample (sputum/CSF)
• Gram staining shows Gram positive lanceolate shaped diplococci

Culture and Sensitivity

• 

• Inoculate sample onto blood agar and chocolate agar plate.
• inkuberes ved 37 liter C med 5-10% CO2 i 24 – 48 timer.

Kolonimorfologi

• kolonier på blodagarpladen er små (0,5 mm), runde, transluscent eller mucoid med alfa-hæmolyse (en grøn misfarvning af agaren omkring kolonierne). Alfa-hæmolytisk egenskab adskiller S. pneumoniae fra mange arter, men ikke fra de commensal alfa-hæmolytiske (viridans) streptokokker.
• unge alfa-hæmolytiske kolonier synes hævet, og i 24 – 48 timer kolonier er fladtrykt med deprimeret center og kaldes ordfører koloni. Det skyldes delvis autolyse (disse kolonier identificeres foreløbigt som pneumokokker).
• Streptococcus viridans producerer også alfa-hæmolytiske kolonier, men producerer ikke draughstman-kolonien.

Alfa-hæmolytiske kolonier identificeres yderligere ved følgende bekræftende tests.

identifikation af Streptococcus pneumoniae ved biokemiske reaktioner.

A. Optochin test (6 mm skive med 5 liter).

• inokulerer blodagarplade med mistænkte alfa-hæmolytiske isolater.
• Påfør kommercielt tilgængelige optochin-diske på den stribede blodagarplade
• inkuber plader ved 37 liter C med 5-10% CO2 i 18-24 timer.

Overhold væksthæmmelsesområdet omkring disken og fortolke som:

• en områdestørrelse> 14mm indikerer modtagelighed, som er diagnostisk for Streptococcus pneumoniae.alfa-hæmolytiske kolonier med inhiberingsområde mellem 9 og 13 mm skal testes for galdeopløselighed.

B. Galdeopløselighedstest.

• alfa-hæmolytiske kolonier, der viser inhiberingsområde omkring optochinskive mellem 9 og 13 mm, skal testes for galdeopløselighed.
• Forbered 1,0 ml saltvandssuspension af organismen fra blodagarpladen. Suspensionens turbiditet skal svare til 0,5 McFarland standard.
  

  

• inokulerer 0,5 ml af suspensionen i to rør.
• tilsæt en lige stor mængde (0,5 ml) 2% natriumdeoksicholat i et rør markeret som test og 0,5 ml saltvand i det andet rør markeret som kontrol.
• Ryst forsigtigt og inkuber rørene ved 37 liter C i 2 timer.

læsning

• positiv reaktion: Rydning af røret eller tab i turbiditet i nærvær af deoksycholat på grund af forstyrrelse af celler.
• negativ reaktion: persistens af turbiditet.

Bemærk: Denne test kan også udføres direkte på kolonien, og kolonien lyseres ved tilsætning af galdeopløsning.

fortolkning af Optochin-og Galdeopløselighedstest

• områdeinhibering af vækst omkring optochin 14 mm er bestemt pneumokokker.
• et bestemt inhiberingsområde omkring optochin-disk < 14mm, og hvis isolatet er galdeopløseligt, betragtes isolatet som Streptococcus pneumoniae (hvis det ikke er galdeopløseligt, er det ikke Streptococcus pneumoniae).Mneomonics: husk sætningen “Streptococcus pneumoniae er en chef” dvs.Galdeopløselig, Optochinfølsom
• stammer med < 14 mm inhiberingsområde til optochin eller slet ikke noget område, og isolatet er ikke galdeopløseligt, det er ikke pneumokokker. Det er sandsynligvis Streptococcus viridans.

antimikrobiel modtagelighed

• Udfør antimikrobiel følsomhedstest mod en udvalgt gruppe af antimikrobielle stoffer ved diskdiffusionsmetode

rapportering af resultater: Streptococcus pneumoniae isoleret og resistensmønstre med testede antibiotika

påvisning af antigenet

C-kulhydratantigen af Streptococcus pneumoniae kan påvises i urinen (Læs:pneumokok Urinantigen test (UAT): princip, Procedure og resultater ) til behandling af Streptococcus pneumoniae diagnosen lungebetændelse og i CSF til diagnose af pneumokok meningitis.