MRSA-detektion
methicillinresistent Staphylococcus aureus (MRSA) detektions-og identifikationsmetoder
nøglepunkter
- Gram +ve coccus
- drue-lignende klynger af celler
- Resitant til methicillin og andre penicilliner
- kan også kaldes ORSA
methicillinresistent Staphylococcus aureus (MRSA) blev først rapporteret i begyndelsen af 1960 ‘ erne og betragtes nu som et stort hospital erhvervet patogen over hele verden. Udtrykket methicillinresistent bruges Historisk til at beskrive resistens over for nogen af denne klasse af antimikrobielle stoffer. I dag i USA CA. 35% af hospitalsstammer af S. aureus er resistente over for methicillin (eller andre penicillinantibiotika), og i de senere år har fremkomsten af vancomycinresistent S. aureus (VRSA) forårsaget yderligere bekymring.
resistens opstår, når organismen har et Meca-gen, der producerer et ændret penicillinbindende protein, PBP2a (også kendt som PBP2′) og enten en MIC på 2 mg/l eller en methicillin MIC på 4 mg/l.
inficerede og koloniserede patienter er reservoiret for MRSA både på hospitaler og i samfundet, hvor transmission generelt er via kontakt med sundhedsarbejdere.
effektiv, hurtig laboratoriediagnose og følsomhedstest er kritisk til behandling, håndtering og forebyggelse af MRSA-infektioner.
detektionsteknikker
Laboratoriescreening for MRSA er en kompleks balance mellem resultathastighed, følsomhed, specificitet og omkostninger.
i øjeblikket udføres størstedelen af screeningen ved hjælp af pladebaserede metoder. Undersøgelser tyder på, at denne metodegruppe tegner sig for >90% af de udførte screeningstest.
imidlertid anvendes en række alternative metoder, herunder bouillonbaserede metoder, kromogene medier, hurtige screeningssæt, molekylære analyser og automatiserede systemer i stigende grad. Isolering fra screeningspinde kan være en langvarig procedure på grund af antallet af ‘kontaminerende’ organismer, der er til stede i vatpinde fra ikke-sterile steder.
bouillonbaserede berigelsesmedier anvendes ofte til at øge følsomheden. Dette er dog på bekostning af hastigheden af resultatet. NaCl tilsættes generelt til basisbuljongen sammen med enten methicillin, oksacillin, cefoksitin. Indikatorforbindelser kan også bruges til at give en tidlig indikation af tilstedeværelsen af MRSA.
fast Agar medier: der er ingen universelle standardiserede metoder til screening og isolering af MRSA ved hjælp af fast agar medier. Mange selektive medier er tilgængelige, og disse er afhængige af inhibitorer som NaCl og/eller antibiotika for at hjælpe udvælgelsen sammen med en pH-indikator for at fremhæve formodninger. Eksempler er Mannitolsalt Agar indeholdende 7% NaCl med enten 4 mg/L methicillin eller 2 mg / L; Agar med 5,5% NaCl og 2 mg/L; Baird Parker Medium med 8 mg/L; Mueller Hinton Agar med 4% NaCl og 6 mg/L oksacillin. Følsomhed ved 24 timers inkubation er variabel med 48 timers inkubation, der ofte kræves for et acceptabelt resultat.
nyligt udviklede kromogene medier kombinerer primær vækst og selektivitet med differentiering fra koagulase negative stafylokokker. Disse medier viser forbedret specificitet sammenlignet med traditionelle medier. Følsomheden forbedres også, men kræver 48 timers inkubation for at opnå >85%.
størstedelen af molekylære metoder, der anvendes til påvisning af MRSA,er interne, idet de er afhængige af multipleksede PCR-primere, der detekterer gener, der er specifikke for S. aureus (nuc, fem) og mecA, der detekterer methicillinresistens. De fleste er kun egnede til brug med rene kulturer og ikke screening af vatpinde på grund af tilstedeværelsen af koagulase-negative stafylokokker, der bærer det methicillinresistente gen Meca. Nyere kommercielt tilgængelige amplifikationsanalyser rettet mod mecA i kombination med andre specifikke markører, såsom koagulase og har vist opmuntrende resultater
der har været en række udviklinger med bioluminescens, især brugen af adenylatkinase (AK), et f.eks. findes i alle celler, der producerer ATP fra ADP. AK-måling er mere følsom end ATP-baserede systemer og tillader rutinemæssig påvisning af 50 organismer eller mere i en prøve. Tidlige præstationsdata viser resultater svarende til konventionelle pladekulturmetoder, mens de giver resultater inden for 5 timer.
identifikation/bekræftelse
traditionelt bekræftelse af S. aureus udføres ved hjælp af glidekoagulasetesten (klumpfaktor) og rørkoagulasetesten (fri koagulase). Positive på diascoagulasetesten skal bekræftes med tubecoagulasetesten. DNase medieplader kan også bruges, men positive kræver yderligere bekræftelse.Agglutinationssæt er bredt tilgængelige og kan bruges til at bekræfte S. aureus ved at detektere protein A og klumpfaktor, selvom nogle stammer af MRSA har lave niveauer af disse proteiner. Nyere sæt fungerer nu ved også at detektere overfladeantigen. Andre latekssæt detekterer PBP2a, som forekommer inden i cellemembranen og kræver lysis af cellerne til påvisning.
en bred vifte af kommercielle biokemiske kits er tilgængelige, både manuel og automatiseret. Disse er baseret på en række biokemiske tests, der giver en profil vurderet ud fra databaser/tabeller. Mange automatiserede systemer kombinerer biokemisk identifikation af S. aureus med antibiotiske følsomhedspaneler til bekræftelse af MRSA.
antibiotiske Følsomhedsmetoder
metoder til methicillin-og oksacillin-følsomhedstest er omfattende, og offentliggjorte data er modstridende med hensyn til anbefalinger.
der er ingen enkelt metode, der passer til alle MRSA-stammer. Standardmetoder udgives af British Society for Antimicrobial Chemotherapy (BSAC) og i USA af Clinical Laboratory Standards Institute (CLSI), tidligere kendt som nccls.
Minimum hæmmende koncentration ved fortyndingsmetoden har traditionelt været referencemetoden.
BSAC anbefaler brug af Mueller Hinton eller Columbia-agar med 2% NaCl og 104 cfu/ml inokulum inkuberet ved 30 liter C. CLSI anbefaler Mueller Hinton-Agar med 2% NaCl og 104 cfu/ml inokulum inkuberet ved 33-35 liter C.
molekylære metoder, der detekterer Meca-genet, erstatter MIC som referencemetode.
Antibiotikasensitivitetstest ved hjælp af diskdiffusionsmetoder forbliver den mest anvendte, men resultaterne påvirkes af en række faktorer, herunder medium, NaCl-koncentration, temperatur, inokulum og testmiddel.
en række nylige undersøgelser, der anvender diffusionsmetoden cefoksitin disk, tyder på større pålidelighed end med oksacillin. Der kræves ingen speciel medium eller inkubationstemperatur, og testen påvirkes mindre af hyper-producenter af penicillinase.
det seneste CLSI-supplement (M100-S14) antyder brugen af 30 cefoksitin-diske med et brudpunkt på<= 19 mm som tegn på S. aureus-resistens over for oksacillin. Andre mediebaserede metoder inkluderer agar, bouillonbaserede breakpoint-metoder (2 mg/L oksacillin, 4 mg/L methicillin) og agar-screeningsmetoder anbefalet af CLSI (godkendt standard M7-A6).
MRSA er ikke længere kun en infektion , der erhverves på hospitaler, selvom dette fortsat er en primær transmissionskilde.
i stigende grad kan MRSA erhverves i samfundet og faktisk fra kæledyr . Dette er måske den mere bekymrende tendens på grund af den potentielt store værtspopulation og understreger behovet for markant øget kontrol med, hvordan og hvornår antibiotika anvendes.
udbredt levering af antibiotika uden for klinisk signifikante anvendelser kan kun føre til yderligere udvælgelse af organismer, der er resistente over for højere niveauer af antibiotika.
definitioner: Hvad er ESKAPE patogener?
ofte omtalt i medierne som ‘superbugs’, ESKAPE-patogenerne (Enterococcus faecium, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae, Acinetobacter baumannii, Pseudomonas aeruginosa, Enterobacter spp.) anses for at være den førende årsag til hospitalserhvervede infektioner globalt.
få de seneste opdateringer i hurtige mikrobiologiske testmetoder sendt til din e-mail? Abonner på den gratis rapidmicrobiology Nyhedsbrev