rekombinant ydre overfladeprotein a (des-Cys1-OspA) fra Lyme-sygdommen spirochete Borrelia burgdorferi: høje produktionsniveauer i Saccharomyces cerevisiae gærkulturer

det rekombinante ydre overfladeprotein A med en n-terminalt afkortet form (des-cys1-Ospa) fra Lyme-sygdommen spirochete Borrelia burgdorferi blev udtrykt i Saccharomyces cerevisiae ved høje produktionsniveauer. Da den rekombinante vaccinekandidat udtrykt i Escherichia coli udviser lave produktionsudbytter, og oprensningen af lipoproteiner synes at være vanskelig, har vi undersøgt sekretionen af en opløselig rekombinant OspA i gæren S. cerevisiae. På denne måde blev et Leu+-derivat af S. cerevisiae cI3ABYS86 anvendt som værtsstammen transformeret med et ekspressionsplasmid indeholdende genet, der koder for des-Cys1-OspA og drevet af MF alpha 1-promotoren. Fed-batch kultur resultater viste, at en effektiv sekretion af des-Cys1-OspA opnås med et højt produktionsniveau på omkring 2.1 g l-1 ved en celletæthed på 101 g L-1 celletørvægt. Akkumuleringen af rekombinant protein i supernatanten overstiger 6% af de samlede gærproteiner, når det estimeres ved natriumdodecylsulfat/polyacrylamidgelelektroforese. Desuden viste des-Cys1-OspA lavere opløseligheder ved høje celletætheder, og som en konsekvens udfældede en brøkdel af det rekombinante protein. En intern spaltning af MF alpha 1 pro::des-Cys1-OspA-forløberen blev også påvist. I dette tilfælde forekom spaltningen imidlertid med en sådan frekvens, at de store mængder af den udskilte des-Cys1-OspA kunne anvendes til evaluering af en immunogen virkning på dyreimmunisering. Disse undersøgelser vil udvide viden om nytten af OspA som en vaccine mod Lyme borreliose.