How to identify Streptococcus pneumoniae?

Streptococcus pneumoniae (pneumococci) is a part of the normal nasopharyngeal and oropharyngeal flora. It is an important etiological agent of upper and lower respiratory tract infections (URTI and LRTI), bacteremia and septicemia. Streptococcus pneumoniae is also associated with otitis media, sinusitis, meningitis and endocarditis.

Los neumococos son diplococos gram positivos en forma de lanceta (intracelulares o extracelulares), no móviles y encapsulados. Ocurren en pares con el extremo más amplio opuesto, por lo tanto llamados diplococos Gram positivos. S. pneumoniae es una bacteria exigente, que crece mejor a 35-37 ° C con ~5% de CO2 (o en un frasco de velas).

Diagnóstico de laboratorio

El diagnóstico de laboratorio de infección por Streptococcus pneumoniae se basa en encontrar características de la forma del organismo en el esputo, morfología característica de la colonia, reacciones bioquímicas, susceptibilidad a ciertos discos de diagnóstico y prueba de aglutinación de látex.

Cultivo e identificación durante la sospecha de infección por Streptococcus pneumoniae

1. Microscopy and Staining

• Perform Gram staining of the sample (sputum/CSF)
• Gram staining shows Gram positive lanceolate shaped diplococci

Culture and Sensitivity

• 

• Inoculate sample onto blood agar and chocolate agar plate.Incubar a 37°C con 5-10% de CO2 durante 24-48 horas.

Morfología de colonias

• Las colonias en la placa de agar sanguíneo son pequeñas (0,5 mm), redondas, translúcidas o mucoides con alfa-hemólisis (Una decoloración verde del agar alrededor de las colonias). La propiedad alfa-hemolítica diferencia a S. pneumoniae de muchas especies, pero no de los estreptococos alfa-hemolíticos comensales (viridans).
• Las colonias alfa-hemolíticas jóvenes aparecen elevadas, y en 24-48 horas las colonias se aplanan con el centro deprimido y se denominan colonia de dibujante. Se debe a una autólisis parcial (estas colonias se identifican tentativamente como neumococos).
• Streptococcus viridans también produce colonias alfa-hemolíticas, pero no produce colonias de dibujantes.

Alfa-hemolítico colonias son más identificado por las siguientes pruebas de confirmación.

Identificación de Streptococcus pneumoniae por reacciones bioquímicas.

A. Prueba de optoquinas (disco de 6 mm con 5 µg).

• Inocular placa de agar sanguíneo con aislados alfa-hemolíticos sospechosos.
• Aplicar discos de optoquina disponibles comercialmente en la placa de agar sangre rayada
• Incubar las placas a 37 ° C con 5-10% de CO2 durante 18-24 horas.

Observar la zona de inhibición del crecimiento alrededor del disco e interpretar como:

• Un tamaño de zona > 14 mm indica susceptibilidad que es diagnóstico de Streptococcus pneumoniae.
• se analizará la solubilidad biliar de las colonias alfa-hemolíticas con una zona de inhibición entre 9 y 13 mm.

B. Prueba de solubilidad biliar.

• las colonias alfa-hemolíticas que muestren una zona de inhibición alrededor del disco de optoquina entre 9 y 13 mm deben analizarse para determinar la solubilidad de la bilis.
• Prepare 1,0 ml de suspensión salina del organismo de la placa de agar sanguíneo. La turbidez de la suspensión debe ser equivalente a 0,5 McFarland estándar.
  

  

Inocular 0,5 ml de la suspensión en dos tubos.
• Añadir una cantidad igual (0,5 ml) de desoxicolato de sodio al 2% en un tubo marcado como prueba y 0,5 ml de solución salina en el segundo tubo marcado como control.
• Agitar suavemente e incubar los tubos a 37°C durante 2 horas.

Leer

• reacción Positiva: Limpieza del tubo o pérdida de turbidez en presencia de desoxicolato debido a la alteración de las células.
• Reacción negativa: Persistencia de la turbidez.

Nota: Esta prueba también se puede hacer directamente en la colonia y la colonia se lisa añadiendo solución biliar.

Interpretación de la optoquina y prueba de solubilidad biliar

• La inhibición de la zona de crecimiento alrededor de la optoquina de 14 mm es definitivamente Neumococos.
• Una zona de inhibición definida alrededor del disco de optoquina < 14 mm y si el aislado es soluble en bilis, el aislado se considera Streptococcus pneumoniae (Si no es soluble en bilis, no es Streptococcus pneumoniae).Neomónica: Recuerde la frase «Streptococcus pneumoniae es un BOSS», es decir, Cepas sensibles a la optoquina y solubles en Bilis
• con < zona de inhibición de optoquina de 14 mm o ninguna zona y el aislado no es soluble en bilis, no es Neumococos. Probablemente es Streptococcus viridans.

Susceptibilidad antimicrobiana

• Realizar una prueba de susceptibilidad antimicrobiana contra un grupo seleccionado de antimicrobianos por método de difusión en disco

Notificación de resultados: Se pueden detectar patrones aislados de Streptococcus pneumoniae y de resistencia con antibióticos probados

Detección del antígeno

El antígeno carbohidrato C del Streptococcus pneumoniae en la orina (Léase:Prueba de Antígeno Urinario Neumocócico (UAT): Principio, Procedimiento y Resultados ) para el diagnóstico de neumonía y en LCR para el diagnóstico de meningitis neumocócica.