ATP Sintasi (FoF1-complesso) per informazioni Dettagliate sull’enzima

ATP sintasi FAQ

Questo elenco di Domande Frequenti (FAQ) su ATP sintasi iswritten con il presupposto che il lettore abbia una backgroundknowledge in biochimica, enzimologia, fisica e chimica.
Questo non è un articolo di revisione o qualcosa del genere; ci sono noreferenze o crediti, e nessuna descrizione dettagliata degli esperimentisottolineare ogni informazione. Se siete interessati a gettinginto dettagli, basta scrivermi una e-mail (feniouk atpsynthase.info) e sarò lieto di discutere qualsiasi delle domandesotto.
La lettura consigliata viene aggiunta per alcune sezioni sotto ““-sign.

indice dei Contenuti

nome Corretto
ruolo Fisiologico dell’ATP sintasi
Differenze tra F-A-V-P-e-Atpasi
L’architettura e composizione di subunità di ATP sintasi
La reazione catalizzata
Termodinamica della sintesi di ATP/idrolisi
forza Trainante per la sintesi di ATP catalizzata dalla ATP sintasi.
Catalisi rotativa
Inibitori dell’ATP sintasi
Inibitori di FO
Inibitori di F1
Rapporto protone/ATP
Posizione dell’ATP sintasi
Quanti siti catalitici ha l’enzima?
Quanto è veloce l’ATP sintasi?
Traslocazione protonica attraverso FO
Che cos’è la sequenza Beta DELSEED?
Posso ottenere una risposta su una domanda non elencata qui?

Nome corretto

Secondo la nomenclatura IUBMBEnzima, l’enzima è chiamato “ATP fosfoidrolasi (H+-trasporto)”. Tuttavia, il nome”ATP sintasi” riflette la funzione primaria dell’enzima piùchiaramente e al giorno d’oggi è più diffuso.
L’altro nome che è stato comunemente usato in passato è “H+-ATPase”,a volte un più preciso “FOF1 H+-ATPase”. Dopo la scoperta di molti altritipi di pompe protoniche basate su ATP questi vecchi nomi sono meno usati.
Gli altri nomi che sono stati utilizzati per l’ATP sintasi sono:
F1-Atpasi
FOF1-Atpasi
F-type Atpasi o semplicemente F-Atpasi
H+trasporto Atpasi
Atpasi mitocondriale
fattori di accoppiamento (F0, F1and CF1)
cloroplasto Atpasi
batterica Ca2+Mg2+Atpasi
complesso ATP sintasi
Complesso V (cinque)

ruolo Fisiologico dell’ATP sintasi

Per fare una lunga storia breve, la funzione principale dell’ATP sintasi nella maggior parte degli organismi è la sintesi di ATP. Da qui il nome. Tuttavia, in alcuni casi è più importante la reazione inversa, cioè la pompa protonica transmembrana alimentata dall’idrolisi dell’ATP. Un esempio tipico: i batteri anaerobici producono ATP dalla fermentazione e l’ATP sintasi utilizza ATP per generare la forza protonmotive necessaria per il trasporto di ioni e la motilità dei flagelli.
Molti batteri possono vivere sia dalla fermentazione che dalla respirazione o dalla fotosintesi. In tal caso ATP sintasefunzioni in entrambi i modi.
Un problema importante è quello di controllare l’attività di pompaggio di protoni ATP-driven dell’ATP sintasi al fine di evitare uno spreco di idrolisi di ATP in condizioni in cui non è possibile generare alcuna forza protonmotrice (ad esempio membrana danneggiata, presenza di disaccoppiamento, ecc.). In tal caso l’idrolisi dell’ATP diventa un problema, perché può scambiare rapidamente il pool di ATP intecellulare. Per evitare questa situazione,tutte le ATP sintasi sono dotate di meccanismi regolatori che sopprimono l’ATPaseattività se non è presente alcuna forza protonmotrice. Il grado di inibizione dell’idrolisi dell’ATP dipende dall’organismo. Nelle piante (nei cloroplasti), dove è necessario conservarepiscina ATP per tutta la notte, l’inibizione è molto forte: l’enzima non ha quasi attività atpasi. Al contrario, nei batteri anaerobici in cui la sinasi ATP è il principalegeneratore della forza protonmotrice, tale inibizione è molto debole. L’ATP sintasi mitocondriale è da qualche partetra.

Differenze tra F-, A-, V-, P-ed E-ATPasi

• “F-type ATPase” è solo un altro nome per ATP sintasi; la lettera “F”viene da “Fattore di fosforilazione”.Le F-ATPasi sono presenti nei batteri, nei mitocondri e nei cloroplasti. La loro funzione principale nella maggior parte dei casi è la sintesi di ATP a scapito della differenza di potenziale del protone transmembraneelectrochemical. In alcuni batteri, tuttavia, la funzione primaria dell’enzima è invertita: ithydrolyzes ATP per generare questa differenza potenziale. Le atpasi di tipo F in vitro possonooperare in entrambe le direzioni a seconda delle condizioni sperimentali.
  Si trovano anche alcune ATPASI Na+-batteriche di tipo F.
• Le ATPASI di tipo A sono state trovate in Archaea, la loro funzione è simile a quella dell’ATP sintasi di tipo F, ma strutturalmente sono molto simili alle ATPasi di tipo V (vedi sotto).
• Le H+-ATPasi di tipo V sono state inizialmente trovate nei vacuoli eucariotici. La loro funzione primaria è il pompaggio di protoni (o Na+) guidati da ATP per acidificare l’interno del vacuolo.
• Le ATPASI di tipo P (a volte denominate ATPasi E1-E2) pompano una varietà di ioni attraverso la membrana e si trovano nei batteri e in molti organelli cellulari eucariotici.
• ATPasi di tipo E (non miscelare con ATPasi E1-E2!) è una famiglia dienzimiche idrolizzano ExtracellularATP (vedi pagina web Ecto-ATPase di HerbertZimmermann per i dettagli)

Le ATPASI di tipo F, A e V sono complessi a più unità, simili in termini di architettura generale, e molto probabilmente hanno lo stesso meccanismo catalitico di base. Theycouple transmembrane proton (o Na+ in alcuni F-ATPases) trasporto, ottenuto dalla rotazione di un certo complesso di subunità rispetto al resto dell’enzima, con atfidrolisi (o sintesi in A – e F-ATPases).
Le caratteristiche comuni per loro sono: forma a “fungo”, dominio catalitico esamericidrofilo di tipo Alfa 3 Beta 3 con subunità Gamma al suo interno. L’atto catalitico eseguito daquei enzimi non include un enzima fosforilatointermediato.
La porzione proton-traslocante di quegli enzimi è composta da una subunità oligomerica a forma di anello (c-subunitàoligomero in caso di ATPasi di tipo F); ogni subunità porta un gruppo carboxilico di importanza critica approssimativamente nel mezzo del suo secondo transmembranehelix. Questo gruppo carbossilico è direttamente coinvolto inslocazione protonica.
Le ATPASI di tipo P sono una famiglia piuttosto diversa di pompe a traslazione di ioni. La maggior parte di essi sono anche proteine multisubunitmembrane; una grande f esegue sia l’atfidrolisi che il pompaggio di ioni. Esistono molte sottofamiglie diverse di ATPasi di tipo P, solitamente classificate in base allotrans che trasportano. H+, Na+, K+, Mg2+, Ca2+, Ag + Eag2+, Zn2+, Co2+, Pb2+, Ni2+, Cd2+, Cu + e Cu2 + pompaggio P-ATPasi sono descritti.
Durante l’idrolisi dell’ATP da parte di un P-ATPaseat un certo stadio del ciclo catalitico il fosfato viene trasferito auno dei residui di Asp dell’enzima. There is no evidence (neitherstructural nor functional) for rotary catalysis in P-type ATPases.Typical examples of such enzymes are yeast plasma membrane H+ATPase, K+/Na+ membraneATPase, Ca2+ membraneATPase.

1) Pedersen, P. L., andCarafoli, E. (1987) Ion motive ATPases. I. Ubiquity, properties, andsignificance to cell function. Trends Biochem. Sci. 4:146-150. 2) ATPaseDatabase di tipo P (Di Kristian B. Alexsen, Istituto svizzero di bioinformatica) 3 ) Kawasaki-Nishi S, Nishi T, Forgac M. (2003) Traslocazione di protoni per idrolisi di ATP in V-ATPasi. FEBS Lett. 545(1): 76-85. 4) Perzov N, Padler-Karavani V, Nelson H, Nelson N. (2001) Caratteristiche di V-ATPasi che li distinguono dalle F-ATPasi. FEBS Lett. 504(3): 223-8.

L’architettura e la composizione della subunità dell’ATP sintasi

L’ATP sintasi è un grande complesso proteico asimmetrico a forma di fungo. L’enzima batterico più semplice (vedi il cartone sotto) è composto da 8 tipi di unità, di cui 5 formano la porzione F1 idrofila catalitica (il”cappuccio” del fungo). Queste subunità sono denominate dalle lettere greche (Alfa, beta, gamma, Delta ed Epsilon) conformemente al loro peso molecolare. Il protone translocating FO porzione è composta ofsubunits di 3 tipi denominati a, b e c.

catalitico parte dell’ATP sintasi (F1) è formata byAlpha 3Beta 3 hexamer con subunità Gamma all’interno di essa e Epsilonattached di Gamma. Il delta della subunità è legato alla” parte superiore ” dell’esamero e delle subunità b.Il segmento transmembrana idrofobo della subunità b è in contatto con la subunità a.Le subunità Gamma e Epsilon del dominio catalitico sono legate all’oligomero a forma di c delle subunità C.La traslocazione dei protoni avviene all’interfaccia delle subunità a e c.
La stechiometria delle subunità è:

Chloroplast ATP synthase and the enzyme from some photosyntheticbacteriahave 2 different, although similar, b-typesubunits in the protontranslocating FO portion, vale a dire b e b’, una copia di ciascuno.
Alta omologia si trova per la maggior parte delle subunità ATP sintasi fromdifferentbatteri e cloroplasti.
L’enzima mitocondriale è molto più complesso; 17 diversi tipi disubunità sono descritti al momento. Alcune di queste subunità hanno un’elevata omologia alle controparti batteriche e cloroplastiche, in particolare le subunità Alfa, Beta e gamma nella porzione F1 e le subunità a e c nella porzione FOportion. Molte subunità sono uniche per l’enzima mitocondriale (vedi Tabella della nomenclatura delle subunità per i dettagli).Tuttavia, il “nucleo” traslocante catalitico e protonico dell’enzima è ancora altamente omologico a quello della atpsintasi batterica e cloroplastica. Anche la topologia generale dell’enzima è abbastanza simile.

La reazione catalizzata

ATP sintasi catalizza la sintesi di ATP/idrolisi accoppiato totransmembrane trasferimento di protoni.In caso di sintesi dell’energia in ingresso comesfrom protonici flusso attraverso FO in discesa transmembraneelectrochemical protone differenza di potenziale ().In caso di idrolisi l’enzima funziona come una pompa protonica guidata da ATP e genera .
L’equazione della reazione catalizzata è

ADP3- + Pi2- + nH+P <> ATP4- + H2O+ (n-1)H+N ( pH > 7.2 )

“P” e “N” indici denotano positiva e carica negativa lati di l’accoppiamento di membrana.
Il valore del pH è importante: il valore pK per Pi2 – + H+ <> Pi – è 7.2, mentre i valori PK corrispondenti per il fosfato in ADP e ATP sono vicini a 6.9.
Questo significa che nell’intervallo di pH 6,9-7,2 il prevailingreaction non includono la cattura di protoni:

ADP3- + Pi- + nH+P <> ATP4- + H2O+ nH+N ( pH 6.9-7.2 )

Tuttavia, sotto pH = 6.9, la reazione prevalente è di nuovo accompaniedby protontrapping:

ADP2- + Pi- + nH+P <> ATP3- + H2O+ (n-1)H+N ( pH < 6.9 )

Thermodynamics of the ATP synthesis/hydrolysis

Traditionally the thermodynamics of ATP synthesis/hydrolysis isdescribed for the hydrolysis reaction:

ATP4- + H2O <> ADP3- + Pi2- + H+ ( pH > 7.2 )

“Physical Chemistry”(P.W.Atkins, 2a edizione) dà un valore di -30 kJ mol-1 (-7.16 kcal/mol) a 37oCas un cambiamento energetico standard “biologico” Gibbsfree (o) per thisreaction. Questa è una stima ragionevole, per cifre da -28 a -36 kJmol-1può essere trovato in letteratura, il più popolare è -30.6 kJ mol-1(-7.3 kcal/mol).
La variazione di energia libera da Gibbs standard, o, è la quantità totale di energia che viene consumata o rilasciata durante una reazione chimica in condizioni standard quando le attività chimiche di tutti i reagenti sono pari a 1. In caso di reazioni in soluzioni acquose, le attività sono generalmente sostituite da concentrazioni (cioè 1 M); l’attività dell’acqua stessa è considerata come 1. “Biologico” standard Gibbsfree energy change,o, è un simileparametro, ma è definito a pH 7, cioè la concentrazione di H+non è 1 M,ma 10-7M. È più pratico e conveniente, poiché la maggior parte delle reazioni biologiche avviene a pH fisiologico.
Un punto molto importante, e talvolta ignorato, è che o non è la quantità di energia disponibile per guidare altre reazioni endotermiche nella cellula, perché le condizioni nella cellula non sono standard(vedi la definizione sopra). L’effettiva variazione di energia di Gibbs è
o’+ 2.3 RT log ,
dove PROGETTO,CPi, CH+,e CATP sono le effettive concentrazioni del corrispondente reagenti, R è il molare del gas costante(8.314 J mol-1K-1), andT è la temperatura in gradi Kelvin. Per chiarire questo punto, consideriamo il seguente esempio con i valori arbitrari che sono vicini alle reali concentrazioni intracellulari:

L’energia di Gibbs cambiare in tali condizioni (temperatura 310oK,o a 37oC) sarà
o’+ 2.3 RT log ( CADPCPi CH+ / CATP )= -30 – 19.6 = – 49.6 kJ mol-1
Questa cifra, calcolata in base alle effettive concentrazioni di thereaction componenti, riflette l’energia disponibile come guida forcefor qualsiasi altro processo accoppiato ad idrolisi di ATP, in date condizioni.
Ne consegue che lo stesso 49.6 kJ mol-1 deve essere fornito dal trasporto di protoni attraverso la membrana lungo il gradiente elettrochimico per mantenere un rapporto ATP / ADP così elevato. Se assumiamo che 3protoni vengono trasportati per ogni molecola di ATP sintetizzata, atransmembrane H + gradiente elettrochimico di 49,6 / 3= 16,5 kJ mol-1(cioè, protonmotiveforce di 171 mV) è necessario.

La conclusione dell’esempio sopra è:
L’energia fornita dall’idrolisi dell’ATP non è fissa (così come l’energia necessaria per sintetizzare l’ATP). In prima approssimazione dipende dalle concentrazioni di ADP, ATP, Pi e dal pH. Questa energia aumenta logaritmicamente al diminuire della concentrazione di inADP e Pi e all’aumento della concentrazione di ATP o H+ (=diminuisce linearmente con l’aumento del pH). I grafici seguenti illustrano questo punto, showingchange nel cambiamento in theconcentrationof un reagente (asse x),supponendo che le concentrazioni di altri reagenti sono tenuti constantat valori utilizzati nell’esempio di cui sopra (punti rossi indicano il calcolato in questo esempio).

Per chiudere questa sezione, vorrei notare che sebbene la termodinamica della sintesi di ATP descritta qui possa sembrare piuttosto complessa, in realtà è molto più complessa. Un punto trascurato qui è statoi diversi stati di protonazione ADP e ATP (vedi sopra), l’altro è che i substrati effettivi nella reazione catalizzata dall’ATP sintasi non sono nucleotidi puri, ma i loro complessi di magnesium. Tuttavia, poiché la concentrazione di magnesio nella cellula viventeè relativamente alto e il pH è solitamente superiore a 7.2, so the descriptiongiven is still applicable for thermodynamic estimates.

1) Nicholls, D. G. and S.J. Ferguson. Bioenergetics 2,London:Academic Press, 1992. 2) Any edition of “Physical Chemistry”by P. Atkins

Driving force for ATP synthesis catalyzed by ATP synthase.

La sintesi di ATP catalizzata da ATP sintasi è alimentata dalla differenza di potenziale elettrochimica del protone transmembrana, composta da due componenti: quello chimico e quello elettrico. Più protoni sono su un lato di una membrana relativetothe altro, maggiore è la forza trainante per un protone di attraversare themembrane. Poiché il protone è una particella carica, il suo movimento è anche influenzato dal campo elettrico: la differenza del potenziale elettrico transmembrana guiderà i protoni dal lato caricato positivamente a quello caricato negativamente.

Un mulino ad acqua è una buona analogia: la differenza tra l’acqua levelsbefore e dopo la diga fornisce energia potenziale; in discesa acqua flowrotates thewheel; la rotazione è utilizzato per eseguire alcuni lavori (sintesi di ATP in ourcase).

Quantitativamente è misurato in Joule per mole (J mol-1) ed è definito come:

= -F + 2.3 RT (pHP – pHN),

dove la “P” e “N” indici denotano positiva e carica negativa lati di l’accoppiamento di membrana; F è la costante di Faraday(96 485 C mol-1); R è il molare del gas costante(8.314 J mol-1K-1),T è la temperatura in gradi Kelvin, e è thetransmembrane differenza di potenziale elettrico involts. Il valore di indica quanta energia è richiesta (o viene rilasciata, a seconda della direzione del flusso protonico transmembrana) per spostare 1 mol di protoni attraverso la membrana.
è spesso più conveniente per non usare , ma protonmotive forza (pmf):

pmf = – /F = -2.3RT/F (pHP – pHN)

A temperatura ambiente (25 ° c) il protonmotive forza (inmillivolts, come pure ):

pmf = – 59 (pHP – pHN)

In assenza di transmembrana pH differenza pmf è uguale al transmembraneelectrical differenza di potenziale e può essere misurata direttamente mediante severalexperimental tecniche (cioè permeare ioni di distribuzione,sensibili al potenziale coloranti, elettrocromico carotenoidi bandshift, etc.).Ogni unità di pH del gradiente di pH transmembrana corrisponde a 59 mVof pmf.
Per la maggior parte delle membrane biologiche impegnate nella sintesi di ATP il valore di pmf è compreso tra 120 e 200mV ( tra 11,6 e 19,3 kJ mol-1).

1) Nicholls, D. G. e S. J. Ferguson. Bioenergetica 2, Londra: Academic Press, 1992. 2) Una lezione sul potenziale elettrochimico del Prof. A. R. Crofts 3) Cramer, W. A. e D. B. Knaff. EnergyTransduction in Membrane Biologiche: Un Libro di testo di Bioenergetica, Springer-VerlagNew York/Berlino/Londra

il Rotary catalisi

Il meccanismo catalitico di ATP synthasemost probabilmente coinvolge rotazione di subunità Gamma insieme con subunitEpsilon e c-subunitoligomer rispetto al resto dell’enzima. Tale rotazione è stata dimostrata sperimentalmente per l’idrolisi di ATP disaccoppiata alla traslocazione di protoni. Inoltre, recenti esperimenti hanno rivelato, che se Gammasubunit è meccanicamente forzata in rotazione, sintesi di ATP avviene anche senza protone-traslocando FO-porzione.
Sembra molto probabile che tale rotazione avvenga in vivo. Tuttavia, non vi è evidenze sperimentali dirette per tale meccanismo rotativo nell’intactenzyme in condizioni fisiologiche.
Il meccanismo proposto è il seguente:

1. Guidato dalla forza protonica, i protoni vengono trasferiti attraverso la porzione FO dell’enzima. Questo trasferimento determina la rotazione dell’anello c-subunitoligomer rispetto alle subunità a e b (vedi qui per i dettagli).
2. La rotazione viene passata alle subunità Gamma ed Epsilon che sono legate all’anello c-subunitoligomer. La rotazione della subunità Gamma asimmetrica meccanicamenteprovoca cambiamenti conformazionali nell’Alfa 3 Beta 3-esamero. Ogni 120 gradi della rotazione della subunità Gamma forza uno dei 3 siti catalitici situati all’interfaccia Alfa-beta in una conformazione aperta. La molecola di ATP appena sintetizzata viene rilasciata, efosfato e ADP sono invece legati. L’alta affinità del sitetofosfato aperto altera il rebinding di ATP e favorisce il legame di ADP.
3. La rotazione va oltre, la subunità Gamma trasforma altri 120 gradi forzando il sito successivo nella conformazione aperta, e l’ADP e il fosfato legati al sito aperto precedente sono occlusi e avviene la atpsintesi. La molecola di ATP formata viene rilasciata quando illa subunità GAMMA fa girare di 360 gradi e apre nuovamente il sito.

1) W. Junge, H. Lill, andS. Engelbrecht. (1997) ATP synthase:anelectrochemical transducer with rotatory mechanics. Trends Biochem.Sci. 22(11):420-423, . 2) H. Wang and G. Oster. (1998) Energytransduction in the F1 motor of ATP synthase. Nature 396 (6708):279-282. 3) Weber, J., and Senior, A. E. (2003) ATPsynthesis driven by proton transport in F1FO-ATPsynthase. FEBS Lett. 545(1): 61-70. 4) film Bello a http://nature.berkeley.edu/~hongwang/Project/ATP_synthase/

Inibitori dell’ATP sintasi

ATP sintasi attività è specificamente inibita da diversi composti(organici e inorganici). La maggior parte di questi inibitori sono molto tossici, quindi grande cura e adeguate precauzioni di sicurezza sono essenziali quando si lavora con loro (non è molto sorprendente che otteniamo infelici quando IL NOSTRO ATP sintasi è bloccato!).La maggior parte degli inibitori sono specifici sia per protone-traslocando FO-porzione, o hydrophilicF1-porzione, quindi la sezione sottostante è diviso di conseguenza.

Inibitori di FO

Oligomycin

Oligomycin Un

Oligomycin è l’inibitore che ha dato il nome di “FO” per la membrana incorporato parte dell’ATP sintasi. La lettera di pedice ” O ” in FO (non zero!) deriva dalla sensibilità oligomicina di questo fattore idrofobicphosphorylation nei mitocondri.
L’oligomicina si lega all’interfaccia della subunità a e dell’oligomero dell’anello c e blocca la traslocazione rotativa del protone in FO. Se l’enzima è ben accoppiato, anche l’attività di F1è bloccata. A causa di quest’ultimo fenomeno, una subunità di F1-porzione mitocondriale che collega F1 con FO è stata chiamata Oligomicina-sensibilità Confering Protein (OSCP).Questa subunità è essenziale per un buon accoppiamento tra F1 e FO e rende l’attività ATPasi di F1 sensibile all’oligomicina inibitrice FO, da cui il nome.
L’oligomicina è specifica per l’ATP sintasi mitocondriale e nelle concentrazioni micromolari blocca efficacemente il trasporto di protoni attraverso FO. Questo inibitore funziona anche in alcuni enzimi batterici che mostrano elevata somiglianza con l’ATP sintasi mitocondriale, ad esempio enzima dal batterio viola Rhodobacter capsulatus. Ma l’ATP sintasi dei cloroplasti e della maggior parte dei batteri (compresa l’Escherichia coli)ha una bassa sensibilità all’oligomicina.
Va anche notato che l’oligomicina in alte concentrazioni influenza anche l’attività di F1 mitocondriale.

DCCD

DCCD

DCCD (abbreviation for Dicyclohexylcarbodiimide; also known as DCC, as N,N’-dicyclohexylcarbodiimide, as Bis(cyclohexyl)carbodiimide, and as 1,3-dicyclohexylcarbodiimide) is a small organic molecule thatcan covalently modify protonated carboxyl groups. Quando aggiunto all’ATP sintasi a pH superiore a 8, DCCD reagisce quasi esclusivamente con il gruppo carbossilico del residuo amminoacidico acido conservato della subunità c (ecco perché la subunità c è talvolta chiamata “proteina legante DCCD”). questo ha elevato pK e può quindi essere protonato a un pH così alto. La modifica del gruppo carbossilico in una singola subunità c è sufficiente a rendere inattivo l’intero oligomero dell’anello C. Poiché DCCD si lega covalentemente alla subunità c, questa inibizione è irreversibile.
Il gruppo carbossilico del residuo amminoacidico conservato nella subunità c-subunità è presente in tutte le ATP sintasi conosciute finora. Quindi DCCD è un inibitore universale che può funzionare in enzimi batterici, mitocondriali e cloroplasti. Inoltre, anche gli atpasi che trasportano protoni di tipo V e A sono sensibili al DCCD per lo stesso motivo. Anche le ATP sintasi che trasportano sodio sono efficacemente inibite dal DCCD.
A pH inferiore (1 e lo inattiva. Quindi questo composto può essere considerato un inibitore di FO e F1. Tuttavia, l’inibizione di FOis altamente specifico, ben definito e richiede la concentrazione molto più bassa di DCCD in modo da thisinhibitor solitamente è usato come FO-specifico.