How to identify Streptococcus pneumoniae?

Streptococcus pneumoniae (pneumococci) is a part of the normal nasopharyngeal and oropharyngeal flora. It is an important etiological agent of upper and lower respiratory tract infections (URTI and LRTI), bacteremia and septicemia. Streptococcus pneumoniae is also associated with otitis media, sinusitis, meningitis and endocarditis.

Pneumokokker Er Gram-positive lansettformede diplokokker (intracellulært eller ekstracellulært), ikke-motile og innkapslede. De forekommer i par med den bredere enden motsatt, derav Kalt Gram positive diplokokker. S. pneumoniae er en kresen bakterie som vokser best ved 35-37°C med ~5% CO2(eller i en stearinlys).

Laboratoriediagnose

Laboratoriediagnose Av Streptococcus pneumoniae infeksjon er basert på å finne egenskaper form av organismen i sputum, karakteristisk koloni morfologi, biokjemiske reaksjoner, mottakelighet for visse diagnostiske plater og latex agglutinering test.

Kultur og identifikasjon ved mistanke Om Streptococcus pneumoniae infeksjon

1. Microscopy and Staining

• Perform Gram staining of the sample (sputum/CSF)
• Gram staining shows Gram positive lanceolate shaped diplococci

Culture and Sensitivity

• 

• Inoculate sample onto blood agar and chocolate agar plate.
• Inkuber ved 37°C med 5-10% CO2 i 24 – 48 timer.

Kolonimorfologi

• Kolonier på blodagarplate er små (0,5 mm), runde, transluscent eller mucoid med alfa-hemolyse (en grønn misfarging av agar rundt koloniene). Alfa-hemolytisk egenskap skiller S. pneumoniae fra mange arter, men ikke fra commensal alfa-hemolytiske (viridans) streptokokker.
• Unge alfa-hemolytiske kolonier vises hevet, og i 24 – 48 timer kolonier er flattrykt med deprimert sentrum og kalles tegnerkoloni. Det skyldes delvis autolyse(disse koloniene er foreløpig identifisert Som Pneumokokker). Streptococcus viridans produserer også alfa-hemolytiske kolonier, men produserer ikke draughstman koloni.

Alfa-hemolytiske kolonier identifiseres ytterligere ved følgende bekreftende tester.

Identifikasjon Av Streptococcus pneumoniae ved biokjemiske reaksjoner.

a. optochin test (6 mm plate med 5µ).

• Inokulere blod agar plate med mistenkte alfa-hemolytiske isolater.
• Påfør kommersielt tilgjengelige optochin-plater på den stripete blodagarplaten
• Inkuber plater ved 37°C med 5-10% CO2 i 18-24 timer.

Observer sonen av veksthemming rundt platen og tolk som:

• en sonestørrelse> 14mm indikerer følsomhet som er diagnostisk For Streptococcus pneumoniae.
• alfa-hemolytiske kolonier med hemmingssone mellom 9 og 13 mm bør testes for galleoppløselighet.

B. Galleoppløselighetstest.

• alfa-hemolytiske kolonier som viser inhiberingssone rundt optokinskiven mellom 9 og 13 mm bør testes for galleoppløselighet.
• Forbered 1,0 ml saltvann suspensjon av organismen fra blod agar plate. Suspensjonens turbiditet skal tilsvare 0,5 McFarland standard.
  

  

• inokulere 0,5 ml av suspensjonen i to rør.
• Tilsett en lik mengde (0,5 ml) av 2% natriumdeoksykolat i ett rør merket som test og 0,5 ml saltvann i det andre røret merket som kontroll.
• Rist forsiktig og inkuber rørene ved 37°C i 2 timer.

Lesing

• Positiv reaksjon: Rydding av røret eller tap i turbiditet i nærvær av deoksykolat på grunn av forstyrrelse av celler.
• Negativ reaksjon: Varighet av turbiditet.

Merk: denne testen kan også gjøres direkte på kolonien og kolonien lyseres ved tilsetning av galleoppløsning.

Tolkning Av Optochin og Galleoppløselighetstest

• Soneinhibering av vekst rundt optochin 14mm er definitivt Pneumokokker.
• en bestemt inhiberingssone rundt optochin-platen < 14mm, og hvis isolatet er galleoppløselig, betraktes isolatet Som Streptococcus pneumoniae (hvis ikke galleoppløselig, er Det ikke Streptococcus pneumoniae).Mneomonics: Husk setningen «Streptococcus pneumoniae er EN SJEF»dvs. Galle Løselig, Optochin Sensitive
• Stammer med < 14 mm sone av hemming til optochin eller ingen sone i det hele tatt og isolatet er ikke galle løselig Det Er Ikke Pneumokokker. Det er Sannsynligvis Streptococcus viridans.

Antimikrobiell følsomhet

• utfør antimikrobiell følsomhetstest mot en utvalgt gruppe antimikrobielle midler ved diskdiffusjonsmetode

Rapportering av resultater: Streptococcus pneumoniae isolerte og resistensmønstre med testede antibiotika

Påvisning av antigenet

C-karbohydratantigen Av Streptococcus pneumoniae kan påvises i urinen (Les:Pneumokokk Urin Antigen Testing (UAT): Prinsipp, Prosedyre og Resultater ) for diagnosen av lungebetennelse og i csf for diagnose av pneumokokk meningitt.