MRSA Deteksjon

Meticillinresistente Staphylococcus aureus (MRSA) Deteksjon og Identifikasjonsmetoder

Nøkkelpunkter

• Gram +ve coccus
• Drue som klynger av celler
• Resitant til meticillin og andre penicilliner
• KAN også bli referert TIL SOM ORSA

Meticillinresistent staphylococcus aureus (mrsa) ble først rapportert tidlig på 1960-Tallet Og regnes nå som et stort sykehusoppkjøpt patogen over hele verden. Begrepet meticillinresistent er historisk brukt for å beskrive resistens mot noen av denne klassen av antimikrobielle stoffer. I DAG i USA ca. 35% av sykehusstammer Av s. aureus er resistente mot meticillin (eller andre penicillinantibiotika), og de siste årene har fremveksten av vancomycin-resistente s. aureus (VRSA) forårsaket ytterligere bekymring.Resistens oppstår når organismen har et meca-gen som produserer et endret penicillinbindende protein, PBP2a (også kjent SOM PBP2′) og enten en oksacillinmic på 2 mg / l eller en meticillinmic PÅ 4 mg / l.

Infiserte og koloniserte pasienter er reservoaret AV MRSA både i sykehus og samfunnet med overføring generelt være via kontakt med helsearbeidere.Effektiv, rask laboratoriediagnostikk og følsomhetstesting er avgjørende for å behandle, håndtere OG forebygge MRSA-infeksjoner.

Deteksjonsteknikker

Laboratoriescreening for MRSA er en kompleks balanse mellom hastighet på resultat, følsomhet, spesifisitet og kostnad.

for tiden utføres flertallet av screening ved hjelp av platebaserte metoder. Undersøkelser tyder på at denne metodegruppen står for > 90% av de utførte screeningtestene.

men en rekke alternative metoder, inkludert buljong baserte metoder, kromogene medier, rask screening kits, molekylære analyser og automatiserte systemer blir stadig mer brukt. Isolering fra screening vattpinner kan være en lang prosedyre, på grunn av antall ‘forurensende’ organismer som er til stede i vattpinner fra ikke-sterile steder.

Buljong basert berikelse media er ofte ansatt for å øke følsomheten. Dette skyldes imidlertid hastigheten på resultatet. NaCl legges vanligvis til basebuljongen sammen med enten meticillin, oxacillin, cefoxitin. Indikatorforbindelser kan også brukes til å gi en tidlig indikasjon på tilstedeværelsen AV MRSA.Solid Agar Media: Det finnes ingen universelle standardiserte metoder for screening og isolering AV MRSA ved bruk av solid agar media. Mange selektive medier er tilgjengelige, og disse er avhengige av hemmere Som NaCl og / eller antibiotika for å hjelpe utvalg, sammen med en pH-indikator for å markere presumptives. Eksempler Er Mannitolsaltagar som inneholder 7% NaCl med enten 4 mg/L meticillin eller 2 mg/L oksacillin; Oksacillinresistent Screening Agar med 5,5% nacl og 2 mg/L oksacillin; Baird Parker Medium med 8 mg/L ciprofloxacin; Mueller Hinton Agar med 4% nacl og 6 mg/L oksacillin. Følsomhet ved 24hrs inkubasjon er variabel med 48hrs inkubasjon ofte nødvendig for et akseptabelt resultat.

nylig utviklede kromogene medier kombinerer primær vekst og selektivitet med differensiering fra koagulasenegative stafylokokker. Disse mediene viser forbedret spesifisitet sammenlignet med tradisjonelle medier. Følsomheten er også forbedret, men krever 48 timer inkubasjon for å oppnå>85%.de fleste molekylære metoder som brukes for påvisning AV MRSA er in-house, avhengig av multiplekserte PCR-primere som detekterer gener som er spesifikke for s. aureus (nuc,fem) og mecA som detekterer meticillinresistens. De fleste er kun egnet for bruk med rene kulturer og ikke screening av swabs på grunn av tilstedeværelsen av koagulasenegative stafylokokker som bærer det meticillinresistente genet mecA. Nyere kommersielt tilgjengelige amplifikasjonsanalyser rettet mot mecA i kombinasjon med andre spesifikke markører som koagulase og har vist oppmuntrende resultater

Det har vært en rekke utviklinger med bioluminescens, spesielt bruken av adenylatkinase (AK), et enzym som finnes i alle celler som produserer ATP fra ADP. AK-måling er mer følsom ENN ATP-baserte systemer og tillater rutinemessig deteksjon av 50 organismer eller mer i en prøve. Tidlige ytelsesdata viser resultater som tilsvarer konvensjonelle platekulturmetoder, samtidig som de gir resultater innen 5 timer.

Identifikasjon / Bekreftelse

Tradisjonelt bekreftelse Av s. aureus utføres ved hjelp av glidekoagulasetesten (klumpfaktor) og rørkoagulasetesten (fri koagulase). Positive på glidekoagulasetesten skal bekreftes med rørkoagulasetesten. DNase medieplater kan også brukes, men positive krever ytterligere bekreftelse.Agglutinasjonssett er allment tilgjengelige og kan brukes til å bekrefte s. aureus ved å oppdage protein A og klumpende faktor, selv om noen STAMMER AV MRSA har lave nivåer av disse proteinene. Nyere kits jobber nå ved også å oppdage overflateantigen. Andre latex-sett oppdager PBP2a som forekommer i cellemembranen og krever lysis av cellene for deteksjon.

et bredt spekter av kommersielle biokjemiske sett er tilgjengelig, både manuell og automatisert. Disse er basert på en rekke biokjemiske tester som gir en profil vurdert mot databaser/tabeller. Mange automatiserte systemer kombinerer biokjemisk identifikasjon Av s. aureus med antibiotiske følsomhetspaneler for bekreftelse AV MRSA.

Sensitivitetsmetoder for Antibiotika

Metoder for meticillin-og oksacillin-følsomhetstesting er omfattende og publiserte data er motstridende med hensyn til anbefalinger.

det finnes ingen enkelt metode som passer for ALLE MRSA-stammer. Standardmetoder er publisert Av British Society For Antimicrobial Chemotherapy (BSAC) og I USA, Av Clinical Laboratory Standards Institute (CLSI), tidligere kjent som NCCLS.

Minimum Hemmende Konsentrasjon ved fortynningsmetoden har tradisjonelt vært referansemetoden.

bsac anbefaler Bruk Av Mueller Hinton eller Columbia agar med 2% nacl og 104 cfu / ml inokulum inkubert ved 30°C. CLSI anbefaler Mueller Hinton Agar med 2% nacl og 104 cfu / ml inokulum inkubert ved 33-35°C.

Molekylære metoder som oppdager meca-genet erstatter MIC som referansemetode.antibiotisk sensitivitetstesting ved bruk av diskdiffusjonsmetoder forblir den mest brukte, men resultatene påvirkes av en rekke faktorer, inkludert medium, nacl-konsentrasjon, temperatur, inokulum og testmiddel.

en rekke nyere studier ved bruk av cefoxitin-diskdiffusjonsmetode tyder på større pålitelighet enn med oksacillin. Ingen spesiell medium eller inkubasjonstemperatur er nødvendig, og testen påvirkes mindre av hyper-produsenter av penicillinase.

det nyeste clsi-supplementet (M100-S14) antyder bruk av 30µ cefoxitin-plater ved bruk av et brytepunkt på < = 19mm som indikativ for resistens Av s. aureus mot oksacillin. Andre mediebaserte metoder inkluderer agar, buljongbaserte brytpunktmetoder (2 mg/L oksacillin, 4 mg/L meticillin) og agar screeningsmetoder anbefalt AV CLSI (Godkjent standard M7-A6).

MRSA ER ikke lenger bare en infeksjon som er ervervet på sykehus , selv om DETTE fortsatt er en primær smittekilde.

I Økende GRAD KAN MRSA kjøpes i samfunnet og faktisk fra kjæledyr . Dette er kanskje den mer bekymringsfulle trenden på grunn av den potensielt store vertspopulasjonen, og understreker behovet for betydelig økt kontroll av hvordan og når antibiotika brukes.Utbredt levering av antibiotika utenfor klinisk signifikant bruk kan bare føre til ytterligere utvalg av organismer som er resistente mot høyere nivåer av antibiotika.

Definisjoner: HVA ER ESKAPEPATOGENER? OFTE referert til i media som ‘superbugs’, ESKAPE patogener (Enterococcus faecium, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae, Acinetobacter baumannii, Pseudomonas aeruginosa, Enterobacter spp.) anses å være den ledende årsaken til sykehuservervede infeksjoner globalt.

Få de siste oppdateringene I Raske Mikrobiologiske Testmetoder sendt til din e-post? Abonner på gratis rapidmicrobiology eNewsletter