Rekombinant ytre overflateprotein a (des-cys1-OspA) fra Lyme-sykdommen spirochete borrelia burgdorferi: høye produksjonsnivåer i Saccharomyces cerevisiae gjærkulturer

det rekombinante ytre overflateproteinet a med en n-terminalt avkortet Form (des-Cys1-OspA) fra Lyme-sykdommen spirochete borrelia burgdorferi ble uttrykt i saccharomyces Cerevisiae ved høye produksjonsnivåer. Siden den rekombinante vaksinekandidaten uttrykt i Escherichia coli utviser lave produksjonsutbytter og rensingen av lipoproteiner synes å være vanskelig, har vi undersøkt sekresjonen av en løselig rekombinant OspA i gjær s. cerevisiae. På denne måten ble Et leu+ derivat Av s. cerevisiae cI3ABYS86 brukt som vertsstammen transformert med et uttrykksplasmid som inneholdt genet som koder for des-Cys1-OspA og drevet av mf alpha 1-promotoren. Resultatene fra fed-batch-kulturen viste at en effektiv sekresjon av des-Cys1-OspA oppnås med et høyt produksjonsnivå på ca. 2.1 g l-1 ved en celletetthet på 101 g l-1 celle tørrvekt. Akkumuleringen av rekombinant protein i supernatanten overstiger 6% av de totale gjærproteiner når estimert ved elektroforese av natriumdodecylsulfat / polyakrylamidgel. Videre viste des-Cys1-OspA lavere oppløselighet ved høy celletetthet, og som en konsekvens utfelt en brøkdel av det rekombinante proteinet. En intern spaltning av MF alpha 1 pro:: des-Cys1-OspA-forløperen ble også påvist. I dette tilfellet skjedde imidlertid spaltningen med en frekvens slik at de store mengdene av den utskilte des-Cys1-OspA kunne brukes til evaluering av en immunogen effekt på immunisering hos dyr. Disse studiene vil utvide kunnskapen Om bruken Av OspA som en vaksine for Lyme borreliose.