How to identify Streptococcus pneumoniae?

Streptococcus pneumoniae (pneumococci) is a part of the normal nasopharyngeal and oropharyngeal flora. It is an important etiological agent of upper and lower respiratory tract infections (URTI and LRTI), bacteremia and septicemia. Streptococcus pneumoniae is also associated with otitis media, sinusitis, meningitis and endocarditis.

pneumokoki są Gram dodatnimi lancetowatymi diplokokami (wewnątrzkomórkowo lub pozakomórkowo), nieruchliwymi i zamkniętymi. Występują w parach o szerszym końcu przeciwległym, stąd nazywane Diplokokami Gram-dodatnimi. S. pneumoniae to wybredna bakteria, która najlepiej rośnie w temperaturze 35-37°C z ~5% CO2 (lub w słoiku ze świecami).

diagnostyka laboratoryjna

Diagnostyka laboratoryjna zakażenia Streptococcus pneumoniae opiera się na stwierdzeniu charakterystycznego kształtu organizmu w plwocinie, charakterystycznej morfologii Kolonii, reakcji biochemicznych, podatności na niektóre dyski diagnostyczne oraz testu aglutynacji lateksowej.

hodowla i identyfikacja podczas podejrzewanego zakażenia Streptococcus pneumoniae

1. Microscopy and Staining

• Perform Gram staining of the sample (sputum/CSF)
• Gram staining shows Gram positive lanceolate shaped diplococci

Culture and Sensitivity

• 

• Inoculate sample onto blood agar and chocolate agar plate.
• inkubować w 37°C z 5-10% CO2 przez 24-48 godzin.

morfologia Kolonii

• kolonie na płytce agaru krwi są małe (0,5 mm), okrągłe, półprzezroczyste lub śluzowate z alfa-hemolizą (zielone odbarwienie agaru wokół Kolonii). Właściwość Alfa-hemolityczna odróżnia S. pneumoniae od wielu gatunków, ale nie od komensalnych paciorkowców Alfa-hemolitycznych (viridans).
• Młode kolonie Alfa-hemolityczne pojawiają się podniesione, a w ciągu 24-48 godzin kolonie są spłaszczone z wciętym środkiem i nazywane są kolonią rysowników. Jest to spowodowane częściową autolizą (kolonie te są wstępnie identyfikowane jako pneumokoki).
• Streptococcus viridans produkuje również kolonie Alfa-hemolityczne, ale nie produkuje Kolonii draughstmana.

kolonie Alfa-hemolityczne są dalej identyfikowane za pomocą następujących testów potwierdzających.

Identyfikacja Streptococcus pneumoniae na podstawie reakcji biochemicznych.

A. Test Optochin (dysk 6 mm z 5µg).

• zaszczepić płytkę agarową krwi podejrzanymi izolatami Alfa-hemolitycznymi.
• nałożyć dostępne w handlu krążki optochin na płytkę agaru ze smugami krwi
• inkubować płytki w temperaturze 37°C z 5-10% CO2 przez 18-24 godziny.

Obserwuj strefę hamowania wzrostu wokół tarczy i zinterpretuj jako:

• rozmiar strefy> 14mm wskazuje na podatność, która jest diagnostyczna dla Streptococcus pneumoniae.
• kolonie Alfa-hemolityczne ze strefą hamowania między 9 a 13 mm powinny być badane pod kątem rozpuszczalności w żółci.

B. Test rozpuszczalności żółci.

• kolonie Alfa-hemolityczne wykazujące strefę hamowania wokół tarczy optochin od 9 do 13 mm powinny być badane pod kątem rozpuszczalności w żółci.
• przygotuj 1,0 ml zawiesiny soli fizjologicznej organizmu z płytki agaru krwi. Mętność zawiesiny powinna być równa 0,5 mg / ml.
  

  

• zaszczepić 0,5 ml zawiesiny w dwóch probówkach.
• Dodaj równą ilość (0,5 ml) 2% dezoksycholanu sodu do jednej probówki oznaczonej jako test i 0,5 ml soli fizjologicznej do drugiej probówki oznaczonej jako kontrolna.
• potrząśnij delikatnie i inkubuj probówki w temperaturze 37°C przez 2 godziny.

Czytanie

• reakcja pozytywna: Oczyszczenie rurki lub utrata zmętnienia w obecności deoksycholanu z powodu rozerwania komórek.
• reakcja negatywna: utrzymywanie się zmętnienia.

Uwaga: Ten test można również wykonać bezpośrednio na kolonii, a kolonia jest lizowana przez dodanie roztworu żółci.

interpretacja testu rozpuszczalności Optochiny i żółci

• strefowe hamowanie wzrostu wokół optochiny 14mm to zdecydowanie pneumokoki.
• określona Strefa hamowania wokół dysku optochin< 14mm, a jeśli izolat jest rozpuszczalny w żółci, izolat jest uważany za Streptococcus pneumoniae (jeśli nie jest rozpuszczalny w żółci, nie jest to Streptococcus pneumoniae).Mneomonika: pamiętaj zdanie „Streptococcus pneumoniae is a BOSS”tj. rozpuszczalne w żółci, wrażliwe na Optochinę
• szczepy o< 14 mm Strefa hamowania do optochiny lub Brak strefy w ogóle i izolat nie jest rozpuszczalny w żółci, nie jest Pneumokokiem. To prawdopodobnie Streptococcus viridans.

wrażliwość na środki przeciwdrobnoustrojowe

• wykonaj test wrażliwości na środki przeciwdrobnoustrojowe przeciwko wybranej grupie środków przeciwdrobnoustrojowych metodą dyfuzji dyskowej

raportowanie wyników: Streptococcus pneumoniae wyizolowane i wzorce oporności z testowanymi antybiotykami

wykrywanie antygenu

C-węglowodanowy antygen Streptococcus pneumoniae może być wykryty w moczu (Czytaj:badanie antygenu pneumokokowego w moczu (UAT): zasada, procedura i wyniki ) w diagnostyce zapalenia płuc oraz w CSF w diagnostyce pneumokokowego zapalenia opon mózgowo-rdzeniowych.