rekombinowane białko zewnętrzne a (des – Cys1-OspA) z boreliozy spirochete Borrelia burgdorferi: wysokie poziomy produkcji w kulturach drożdży Saccharomyces cerevisiae

rekombinowane białko zewnętrzne A Z N-terminalnie ściętą postacią (des-Cys1-OspA) cys1-ospa) z boreliozy krętek Borrelia burgdorferi wyrażano w Saccharomyces cerevisiae na wysokim poziomie produkcji. Ponieważ rekombinowany kandydat do szczepionki wyrażony w Escherichia coli wykazuje niską wydajność produkcyjną, a oczyszczanie lipoprotein wydaje się trudne, zbadaliśmy wydzielanie rozpuszczalnego rekombinowanego OspA w drożdżach S. cerevisiae. W ten sposób użyto pochodnej Leu+ S. cerevisiae cI3ABYS86 jako szczepu gospodarza przekształconego plazmidem ekspresyjnym zawierającym gen kodujący des-Cys1-OspA i napędzany przez promotor MF alfa 1. Wyniki hodowli fed-batch wykazały, że skuteczne wydzielanie des-Cys1-OspA uzyskuje się przy wysokim poziomie produkcji około 2.1 g l-1 przy gęstości komórek 101 g suchej masy komórek l-1. Nagromadzenie rekombinowanego białka w supernatancie przekracza 6% całkowitej ilości białek drożdży, gdy szacuje się to za pomocą elektroforezy w żelu dodecyloosiarczanu sodu/poliakrylamidu. Ponadto des-Cys1-OspA wykazywał mniejszą rozpuszczalność przy dużych gęstościach komórek i w konsekwencji wytrącała się frakcja rekombinowanego białka. Wykryto również wewnętrzne rozszczepienie prekursora MF alpha 1 pro::des-Cys1-OspA. Jednak w tym przypadku rozszczepienie następowało z taką częstotliwością, że duże ilości wydzielanego des-Cys1-OspA mogły być wykorzystane do oceny wpływu immunogennego na immunizację zwierząt. Badania te poszerzą wiedzę na temat przydatności OspA jako szczepionki przeciwko boreliozie z Lyme.