Detecção de MRSA

Staphylococcus aureus Resistente à Meticilina (MRSA) Detecção e Identificação de Métodos

Pontos-Chave

• Gram +ve coccus
• Uva como aglomerados de células
• Resitant à meticilina e outras penicilinas
• Pode também ser referido como ORSA

Staphylococcus aureus resistente à Meticilina (MRSA) foram reportados pela primeira vez no início da década de 1960 e agora são considerados como um importante adquiridas no hospital de patógenos em todo o mundo. O termo resistente à meticilina é historicamente usado para descrever a resistência a qualquer desta classe de antimicrobianos. Hoje nos EUA aprox. 35% das estirpes hospitalares de S. aureus são resistentes à meticilina (ou outros antibióticos da penicilina) e, nos últimos anos, o aparecimento de S. aureus resistente à vancomicina (VRSA) tem causado preocupação adicional.

resistência ocorre quando o organismo tem um gene de mecA produzindo uma proteína alterada de ligação à penicilina, PBP2a (também conhecida como PBP2′) e quer uma mica de oxacilina de 2mg/l ou uma mica de meticilina de 4mg/l.os doentes infectados e colonizados são o reservatório de MRSA tanto nos hospitais como na comunidade, sendo a transmissão geralmente efectuada através do contacto com os profissionais de saúde.o diagnóstico laboratorial eficaz e rápido e o teste de susceptibilidade são críticos no tratamento, gestão e prevenção de infecções por MRSA.

técnicas de detecção

rastreio laboratorial para o MRSA é um equilíbrio complexo entre velocidade do resultado, sensibilidade, especificidade e custo.

actualmente, a maior parte do rastreio é efectuado através de métodos baseados em placas. Os inquéritos sugerem que este grupo metodológico representa >90% dos testes de rastreio realizados.no entanto, estão a ser cada vez mais utilizados vários métodos alternativos, incluindo métodos baseados em caldos, meios cromogénicos, kits de rastreio rápido, ensaios moleculares e sistemas automatizados. O isolamento de esfregaços de rastreio pode ser um procedimento moroso, devido ao número de organismos “contaminantes” presentes em esfregaços de locais não esterilizados.os meios de enriquecimento baseados no caldo são frequentemente utilizados para aumentar a sensibilidade. No entanto, isto é à custa da velocidade do resultado. NaCl é geralmente adicionado ao caldo base juntamente com meticilina, oxacilina, cefoxitina. Os compostos indicadores também podem ser utilizados para dar uma indicação precoce da presença de MRSA.meio ágar sólido: não existem métodos normalizados universais de rastreio e isolamento do MRSA utilizando meio ágar sólido. Muitos meios seletivos estão disponíveis, e estes dependem de inibidores como NaCl e/ou antibióticos para auxiliar a seleção, juntamente com um indicador de pH para destacar presuntivos. Exemplos são o Ágar Salgado de manitol contendo 7% de NaCl com 4mg / l de meticilina ou 2mg / L de oxacilina; Agar Resistente à oxacilina com 5, 5% de NaCl e 2 mg/L de oxacilina; meio Baird Parker com 8 mg/L de ciprofloxacina; Agar de Mueller Hinton com 4% de NaCl e 6 mg/L de oxacilina. A sensibilidade à incubação 24hrs é variável com incubação 48hrs muitas vezes necessária para um resultado aceitável.os meios cromogénicos recentemente desenvolvidos combinam crescimento primário e selectividade com diferenciação dos estafilococos coagulase negativos. Estes meios de comunicação mostram maior especificidade quando comparados com os meios de comunicação tradicionais. A sensibilidade também é melhorada, mas requer incubação de 48 horas para atingir >85%.

a maioria dos métodos moleculares utilizados para a detecção de MRSA São in-house, confiando em iniciadores multiplexados PCR detectando genes específicos para S. aureus (nuc,fem) e mecA detectando resistência à meticilina. A maioria só é adequada para utilização em culturas puras e não para despiste de esfregaços devido à presença de estafilococos coagulase negativos que transportem o gene resistente à meticilina mecA. Mais recente disponível comercialmente ensaios de amplificação de segmentação de mecA, em combinação com outros marcadores específicos, tais como coagulase e têm mostrado resultados encorajadores

houve uma série de desenvolvimentos com a bioluminescência, em particular, o uso de adenilato quinase (AK), uma enzima encontrada em todas as células que produzem ATP a partir de ADP. A medição de AK é mais sensível do que os sistemas ATP e permite a detecção de rotina de 50 organismos ou mais numa amostra. Os dados de desempenho precoce mostram resultados equivalentes aos métodos convencionais de cultura de placas, ao mesmo tempo que fornecem resultados dentro de 5 horas.a confirmação tradicional de S. aureus é feita através do teste da coagulase deslizante (factor de aglomeração) e do teste da coagulase tubular (coagulase livre). Os positivos no ensaio de coagulase deslizante devem ser confirmados no ensaio de coagulase tubular. Placas de mídia DNase também podem ser usadas, mas os positivos requerem confirmação adicional.kits de aglutinação

estão amplamente disponíveis e podem ser usados para confirmar S. aureus detectando proteína A e fator de aglomeração, embora algumas estirpes de MRSA tenham baixos níveis destas proteínas. Os kits mais recentes agora funcionam também detectando antigénio de superfície. Outros kits de látex detectam PBP2a que ocorre dentro da membrana celular e requer lise das células para detecção.está disponível uma vasta gama de kits bioquímicos comerciais, manuais e automatizados. Estes são baseados em uma série de testes bioquímicos que dão um perfil avaliado com base em bases de dados/tabelas. Muitos sistemas automatizados combinam a identificação bioquímica de S. aureus com painéis de sensibilidade a antibióticos para a confirmação de MRSA.os métodos de sensibilidade aos antibióticos para os testes de sensibilidade à meticilina e à oxacilina são extensos e os dados publicados são contraditórios no que diz respeito às recomendações.

não existe um único método adequado para todas as estirpes MRSA. Métodos padrão são publicados pelo British Society for Antimicrobial Chemotherapy (BSAC), e nos EUA, pelo Clinical Laboratory Standards Institute (CLSI), anteriormente conhecido como NCCLS.a concentração inibitória mínima pelo método de diluição tem sido tradicionalmente o método de referência.

BSAC de recomendar o uso de Mueller Hinton ou agar de Columbia com 2% de NaCl e 104 ufc/ml de inóculo incubadas a 30°C. CLSI recomenda Mueller Hinton Agar com 2% de NaCl e 104 ufc/ml de inóculo incubadas em 33-35°C.

métodos Moleculares que detectam o gene mecA está substituindo o MIC como o método de referência.os testes de sensibilidade aos antibióticos, utilizando métodos de difusão de discos, continuam a ser os mais utilizados, mas os resultados são influenciados por uma série de factores, incluindo o meio, a concentração de NaCl, a temperatura, o inóculo e o agente de ensaio.vários estudos recentes utilizando o método de difusão do disco da cefoxitina sugerem maior fiabilidade do que com a oxacilina. Não é necessária qualquer temperatura especial de meio ou incubação e o ensaio é menos afectado pelos hiper-produtores de penicilinase.

O mais recente CLSI suplemento (M100-S14) sugere o uso de 30µg cefoxitina discos usando um ponto de interrupção de <= 19mm como indicativo da resistência de S. aureus à oxacilina. Outros métodos baseados em meios incluem o ágar-ágar, os métodos de ponto de rutura baseados em caldo (2mg/l oxacilina, 4mg/L meticilina) e os métodos de rastreio do ágar recomendados pela CLSI (norma aprovada M7-A6).

MRSA já não é apenas uma infecção adquirida em hospitais , embora esta continue a ser uma fonte primária de transmissão.cada vez mais o MRSA pode ser adquirido na comunidade e, na verdade, a partir de animais de estimação . Esta é talvez a tendência mais preocupante devido à população potencialmente numerosa de acolhimento e sublinha a necessidade de um aumento significativo dos controlos de como e quando os antibióticos são utilizados.o fornecimento generalizado de antibióticos fora de utilizações clinicamente significativas só pode levar a uma maior selecção de organismos que resistam a níveis mais elevados de antibióticos.Definições: o que são patógenos ESKAPE? os agentes patogénicos ESKAPE (Enterococcus faecium, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae, Acinetobacter baumannii, Pseudomonas aeruginosa, Enterobacter spp.) são considerados como a principal causa de infecções hospitalares em todo o mundo.obter as últimas actualizações dos métodos de testes microbiológicos rápidos enviados para o seu e-mail? Subscreva o rapidmicrobiology free eNewsletter