How to identify Streptococcus pneumoniae?

Streptococcus pneumoniae (pneumococci) is a part of the normal nasopharyngeal and oropharyngeal flora. It is an important etiological agent of upper and lower respiratory tract infections (URTI and LRTI), bacteremia and septicemia. Streptococcus pneumoniae is also associated with otitis media, sinusitis, meningitis and endocarditis.

Pneumococci são diplococos Gram positivos em forma de lancete (intracelularmente ou extracelular), não-móveis e encapsulados. Eles ocorrem em pares com a extremidade mais ampla oposta, portanto chamada de diplococos Gram positivo. S. pneumoniae é uma bactéria fastidiosa, que cresce melhor a 35-37°C com ~5% de CO2 (ou em um frasco de vela).o diagnóstico laboratorial da infecção por Streptococcus pneumoniae baseia-se na determinação das características Forma do organismo no sputum, morfologia característica das Colónias, reacções bioquímicas, susceptibilidade a certos discos de diagnóstico e teste de aglutinação em látex.

Cultura e identificação durante a suspeita de Streptococcus pneumoniae infecção

1. Microscopy and Staining

• Perform Gram staining of the sample (sputum/CSF)
• Gram staining shows Gram positive lanceolate shaped diplococci

Culture and Sensitivity

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• Inoculate sample onto blood agar and chocolate agar plate.incubar a 37 ° C com 5-10% de CO2 durante 24 – 48 horas.

morfologia da Colónia

• colónias na placa de ágar do sangue são pequenas (0, 5 mm), redondas, translusivas ou mucosas com hemólise Alfa (uma descoloração Verde do ágar em torno das Colónias). A propriedade Alfa-hemolítica diferencia S. pneumoniae de muitas espécies, mas não da comensal Alfa-hemolytic (viridans) streptococci.colónias Alfa-hemolíticas jovens aparecem levantadas, e em colónias de 24 a 48 horas são achatadas com centro deprimido e é chamada Colónia draughtsman. É devido à autólise parcial (estas colónias são tentativamente identificadas como pneumococos). Streptococcus viridans também produz colónias Alfa-hemolíticas, mas não produz colónias de draughstman.

Alfa-hemolíticas colônias são mais identificadas pelos seguintes testes de confirmação.identificação do Streptococcus pneumoniae por reacções bioquímicas.ensaio de Optochin (disco de 6 mm com 5 µg).inocular a placa de ágar sanguíneo com isolados Alfa-hemolíticos suspeitos.aplicar discos de optocina disponíveis no mercado na placa de ágar de sangue estriado

observar a zona de inibição do crescimento em torno do disco e interpretar como:

• A zone size > 14mm indica susceptibilidade que é o diagnóstico de Streptococcus pneumoniae.devem testar-se a solubilidade da bílis em colónias Alfa-hemolíticas com zona de inibição entre 9 e 13 mm.ensaio de solubilidade da bílis.deve testar-se a solubilidade da bílis em colónias Alfa-hemolíticas com zona de inibição em torno do disco de optocina entre 9 e 13 mm.preparar 1, 0 ml de suspensão salina do organismo a partir da placa de ágar do sangue. A turvação da suspensão deve ser equivalente a 0,5 McFarland standard.
  

  

• Inocular 0,5 ml da suspensão em dois tubos.adicionar uma quantidade igual (0, 5 ml) de 2% de desoxicolato de sódio num tubo marcado como ensaio e 0, 5 ml de solução salina no segundo tubo marcado como controlo. agitar suavemente e incubar os tubos a 37°C durante 2 horas.

leitura

• reacção positiva: Limpeza do tubo ou perda de turvação em presença de desoxicolato devido à ruptura das células.reacção negativa: persistência da turvação.Nota: Este teste também pode ser feito directamente na Colónia e a Colónia é lisada por adição de solução biliar.

  interpretação do teste de solubilidade da Optocina e da bílis

  • zona a inibição do crescimento em torno da optocina 14mm é definitivamente pneumococos.
  • uma zona de inibição definida em torno do disco de optocina< 14 mm e se o isolado for solúvel na bílis, o isolado é considerado Streptococcus pneumoniae (se não for solúvel na bílis, não é Streptococcus pneumoniae).Mneomonics: Lembrem-se da frase “o Streptococcus pneumoniae é um CHEFE” i.e. Bile Solúvel, Optochin Sensível
  • Cepas com < 14 mm zona de inibição para optochin ou nenhuma zona e a isolar não é biliares solúvel não é Pneumococos. Deve ser Streptococcus viridans.

  a susceptibilidade Antimicrobiana

  • Executar teste de sensibilidade antimicrobiana contra um selecionado grupo de antimicrobianos por disco-difusão do método

  Relatório de resultados: Streptococcus pneumoniae isolado e padrões de resistência a antibióticos testados

  a Detecção do antígeno

  C-hidratos de carbono antígeno de Streptococcus pneumoniae pode ser detectado na urina (Leia:Pneumocócica Urinário Testes de antígenos (UAT): Princípio, Procedimento e Resultados ) para o diagnóstico de pneumonia e no QCA para o diagnóstico de meningite pneumocócica.