Recombinante exterior da proteína de superfície de Um (des-Cys1-OspA) da doença de Lyme espiroqueta Borrelia burgdorferi: altos níveis de produção em Saccharomyces cerevisiae, levedura culturas

recombinante exterior da superfície de Uma proteína com N-terminais forma truncada (des-Cys1-OspA) a partir da doença de Lyme espiroqueta Borrelia burgdorferi foi expressa em Saccharomyces cerevisiae em altos níveis de produção. Uma vez que o candidato à vacina recombinante expresso em Escherichia coli apresenta rendimentos de produção baixos e a purificação das lipoproteínas parece ser difícil, investigámos a secreção de uma OspA recombinante solúvel na levedura S. cerevisiae. Desta forma, foi utilizado um derivado Leu+ de S. cerevisiae cI3ABYS86 como estirpe Hospedeira transformada com um plasmídeo de expressão contendo o gene que codifica des-Cys1-OspA e conduzido pelo promotor MF alfa 1. Os resultados da cultura fed-batch revelaram que uma secreção eficiente de des-Cys1-OspA é obtida com um alto nível de produção de cerca de 2.1 g l – 1 com uma densidade celular de 101 g de L-1 de peso seco. A acumulação de proteína recombinante no sobrenadante excede 6% do total de proteínas de levedura, quando estimado por dodecilsulfato de sódio/electroforese em gel de poliacrilamida. Além disso, a des-Cys1-OspA revelou solubilidades inferiores a densidades celulares elevadas e, consequentemente, uma fracção da proteína recombinante precipitada. Uma clivagem interna do MF alpha 1 pro::des-Cys1-OspA precursor também foi detectada. No entanto, neste caso, a clivagem ocorreu numa frequência tal que as grandes quantidades da des-Cys1-OspA secretada poderiam ser utilizadas para a avaliação de um efeito imunogénico na imunização animal. Estes estudos alargarão o conhecimento da utilidade da OspA como vacina para a Lyme borreliose.