Detectarea MRSA

metode de detectare și identificare a Staphylococcus aureus rezistent la meticilină (MRSA)

puncte cheie

• Gram +ve coccus
• ciorchini de celule asemănătoare strugurilor
• rezistenți la meticilină și alte peniciline
• poate fi denumit și ORSA

Staphylococcus aureus rezistent la meticilină (MRSA) au fost raportate pentru prima dată la începutul anilor 1960 și sunt acum considerate ca un spital major dobândit patogen la nivel mondial. Termenul rezistent la meticilină este folosit istoric pentru a descrie rezistența la oricare dintre aceste clase de antimicrobiene. Astăzi în SUA aprox. 35% din tulpinile spitalicești de S. aureus sunt rezistente la meticilină (sau alte antibiotice penicilinice), iar în ultimii ani apariția S. aureus rezistent la vancomicină (VRSA) a provocat îngrijorare suplimentară.

rezistența apare atunci când organismul are o genă mecA care produce o proteină modificată de legare a penicilinei, PBP2a (cunoscută și sub numele de PBP2′) și fie un oxacilină MIC de 2 mg/l sau un meticilină MIC de 4 mg / l.

pacienții infectați și colonizați sunt rezervorul de MRSA atât în spitale, cât și în comunitate, transmiterea fiind în general prin contactul cu lucrătorii din domeniul sănătății.

diagnosticul de laborator eficient și rapid și testarea susceptibilității sunt esențiale în tratarea, gestionarea și prevenirea infecțiilor cu MRSA.

tehnici de detectare

screening-ul de laborator pentru MRSA este un echilibru complex între viteza de rezultat, sensibilitate, specificitate și cost.

în prezent, majoritatea screeningului se efectuează folosind metode pe bază de plăci. Sondajele sugerează că acest grup metodologic reprezintă >90% din testele de screening efectuate.

cu toate acestea, sunt utilizate din ce în ce mai multe metode alternative, inclusiv metode bazate pe bulion, medii cromogene, kituri de screening rapid, teste moleculare și sisteme automate. Izolarea de tampoanele de screening poate fi o procedură de lungă durată, datorită numărului de organisme contaminante care sunt prezente în tampoanele din locurile nesterile.mediile de îmbogățire pe bază de bulion sunt utilizate în mod obișnuit pentru a crește sensibilitatea. Cu toate acestea, acest lucru este în detrimentul vitezei de rezultat. NaCl este, în general, adăugat la bulionul de bază împreună cu meticilina, oxacilina, cefoxitina. Compușii indicatori pot fi, de asemenea, utilizați pentru a da o indicație timpurie a prezenței MRSA.

medii solide de Agar: nu există metode standardizate universale pentru depistarea și izolarea MRSA folosind medii solide de agar. Multe medii selective sunt disponibile, iar acestea se bazează pe inhibitori precum NaCl și/sau antibiotice pentru a ajuta la selecție, împreună cu un indicator de pH pentru a evidenția prezumtivele. Exemple sunt Agar de sare de manitol care conține 7% NaCl fie cu 4 mg/l meticilină, fie cu 2 mg/l oxacilină; Agar de Screening rezistent la oxacilină cu 5,5% NaCI și 2 mg/l oxacilină; Mediu Baird Parker cu 8 mg/l ciprofloxacină; agar Mueller Hinton cu 4% NaCI și 6 mg/l oxacilină. Sensibilitatea la incubarea 24hrs este variabilă, cu incubarea 48hrs adesea necesară pentru un rezultat acceptabil.

mediile cromogene recent dezvoltate combină creșterea primară și selectivitatea cu diferențierea de stafilococii coagulazici negativi. Aceste medii prezintă o specificitate îmbunătățită în comparație cu mediile tradiționale. Sensibilitatea este, de asemenea, îmbunătățită, dar necesită incubare 48hrs pentru a atinge >85%.

majoritatea metodelor moleculare utilizate pentru detectarea MRSA sunt interne, bazându-se pe primeri PCR multiplexați care detectează gene specifice pentru S. aureus (nuc,fem) și mecA care detectează rezistența la meticilină. Cele mai multe sunt potrivite numai pentru utilizarea cu culturi pure și nu screening-ul tampoanelor datorită prezenței stafilococilor coagulazici negativi care transportă gena rezistentă la meticilină mecA. Mai noi teste de amplificare disponibile comercial care vizează mecA în combinație cu alți markeri specifici, cum ar fi coagulaza și au arătat rezultate încurajatoare

au existat o serie de evoluții cu bioluminescență, în special utilizarea adenilat kinazei (AK), o enzimă găsită în toate celulele care produc ATP din ADP. Măsurarea AK este mai sensibilă decât sistemele bazate pe ATP și permite detectarea de rutină a 50 de organisme sau mai mult într-o probă. Datele de performanță timpurie arată rezultate echivalente cu metodele convenționale de cultură a plăcilor, oferind în același timp rezultate în decurs de 5 ore.

identificarea/confirmarea

în mod tradițional, confirmarea S. aureus se efectuează utilizând testul coagulazei cu diapozitive (factor de aglomerare) și testul coagulazei cu tuburi (coagulază liberă). Rezultatele pozitive ale testului de coagulază glisantă trebuie confirmate cu testul de coagulază tubulară. Plăcile media DNase pot fi de asemenea utilizate, dar pozitivele necesită confirmare suplimentară.kiturile de aglutinare sunt disponibile pe scară largă și pot fi utilizate pentru a confirma S. aureus prin detectarea proteinei A și a factorului de aglomerare, deși unele tulpini de MRSA au niveluri scăzute ale acestor proteine. Kiturile mai noi funcționează acum detectând și antigenul de suprafață. Alte seturi de latex detectează PBP2a care apare în membrana celulară și necesită liza celulelor pentru detectare.

sunt disponibile o gamă largă de kituri biochimice comerciale, atât manuale, cât și automate. Acestea se bazează pe o serie de teste biochimice care oferă un profil evaluat în funcție de baze de date/tabele. Multe sisteme automate combină identificarea biochimică a S. aureus cu panouri de sensibilitate la antibiotice pentru confirmarea MRSA.

metode de sensibilitate la antibiotice

metodele de testare a sensibilității la meticilină și oxacilină sunt extinse, iar datele publicate sunt contradictorii în ceea ce privește recomandările.

nu există o singură metodă care să fie potrivită pentru toate tulpinile MRSA. Metodele Standard sunt publicate de Societatea Britanică pentru chimioterapie antimicrobiană (BSAC) și în SUA, de Institutul de standarde clinice de laborator (CLSI), cunoscut anterior sub numele de NCCLS.

concentrația minimă inhibitoare prin metoda de diluare a fost în mod tradițional metoda de referință.

BSAC recomandă utilizarea agarului Mueller Hinton sau Columbia cu 2% NaCl și a inoculului 104 cfu/ml incubat la 30% C. CLSI recomandă agar Mueller Hinton cu 2% NaCl și a inoculului 104 cfu/ml incubat la 33-35% C.

metodele moleculare care detectează gena mecA înlocuiesc MIC ca metodă de referință.

testarea sensibilității la antibiotice folosind metode de difuzie a discului rămâne cea mai utilizată, dar rezultatele sunt influențate de o serie de factori, inclusiv mediu, concentrație de NaCl, temperatură, inocul și agent de testare.

o serie de studii recente care utilizează metoda de difuzie a discului cefoxitin sugerează o fiabilitate mai mare decât în cazul oxacilinei. Nu este necesară o temperatură specială de mediu sau de incubație, iar testul este mai puțin afectat de hiper-producătorii de penicilinază.

cel mai recent supliment CLSI (M100-S14) sugerează utilizarea a 30 de discuri de cefoxitină de la un nivel de întrerupere<= 19mm ca indicator al rezistenței S. aureus la oxacilină. Alte metode bazate pe medii includ agar, metode de breakpoint bazate pe bulion (2mg/l oxacilină, 4mg / l meticilină) și metode de screening agar recomandate de CLSI (standard aprobat M7-a6).

MRSA nu mai este doar o infecție care este dobândită în spitale , deși aceasta rămâne o sursă primară de transmitere.

Din ce în ce mai mult MRSA poate fi achiziționat în comunitate și într-adevăr de la animale de companie . Aceasta este probabil tendința mai îngrijorătoare din cauza populației gazdă potențial mare și subliniază necesitatea unui control semnificativ crescut al modului și momentului în care sunt utilizate antibioticele.

administrarea pe scară largă a antibioticelor în afara utilizărilor semnificative din punct de vedere clinic nu poate duce decât la o selecție suplimentară a organismelor rezistente la niveluri mai ridicate de antibiotice.

definiții: ce sunt agenții patogeni ESKAPE?

adesea menționate în mass-media ca ‘superbugs’, agenții patogeni ESKAPE (Enterococcus faecium, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae, Acinetobacter baumannii, Pseudomonas aeruginosa, Enterobacter spp.) sunt considerate a fi principala cauză a infecțiilor dobândite în spital la nivel global.

Primiți cele mai recente actualizări ale metodelor de testare microbiologică rapidă trimise la adresa dvs. de e-mail? Aboneaza-te la eNewsletter gratuit rapidmicrobiology