How to identify Streptococcus pneumoniae?

Streptococcus pneumoniae (pneumococci) is a part of the normal nasopharyngeal and oropharyngeal flora. It is an important etiological agent of upper and lower respiratory tract infections (URTI and LRTI), bacteremia and septicemia. Streptococcus pneumoniae is also associated with otitis media, sinusitis, meningitis and endocarditis.

pneumococii sunt diplococi Gram pozitivi în formă de lancetă (intracelular sau extracelular), non-motili și încapsulați. Ele apar în perechi cu capătul mai larg opus, de aici numit diplococi Gram pozitivi. S. pneumoniae este o bacterie fastidioasă, care crește cel mai bine la 35-37 de centi C cu ~5% CO2 (sau într-un borcan de lumânare).

diagnosticul de laborator

diagnosticul de laborator al infecției cu Streptococcus pneumoniae se bazează pe găsirea caracteristicilor forma organismului în spută, morfologia caracteristică a coloniei, reacțiile biochimice, susceptibilitatea la anumite discuri de diagnostic și testul de aglutinare a latexului.

Cultură și identificare în timpul infecției suspectate cu Streptococcus pneumoniae

1. Microscopy and Staining

• Perform Gram staining of the sample (sputum/CSF)
• Gram staining shows Gram positive lanceolate shaped diplococci

Culture and Sensitivity

• 

• Inoculate sample onto blood agar and chocolate agar plate.
• se incubează la 37 CTC cu 5-10% CO2 timp de 24 – 48 ore.

morfologia coloniei

• coloniile de pe placa de agar sanguin sunt mici (0,5 mm), rotunde, transluscente sau mucoide cu alfa-hemoliză (o decolorare verde a agarului din jurul coloniilor). Proprietatea alfa-hemolitică diferențiază S. pneumoniae de multe specii, dar nu de streptococii comensali alfa-hemolitici (viridani).
• coloniile alfa-hemolitice tinere apar crescute, iar în 24 – 48 de ore coloniile sunt aplatizate cu Centrul deprimat și se numește colonie desenator. Se datorează autolizei parțiale (aceste colonii sunt identificate provizoriu ca pneumococi).
• Streptococcus viridans produce, de asemenea, colonii alfa-hemolitice, dar nu produce colonii draughstman.

coloniile Alfa-hemolitice sunt identificate în continuare prin următoarele teste de confirmare.

identificarea Streptococcus pneumoniae prin reacții biochimice.

A. test Optochin (disc de 6 mm cu 5 hectolitri).

• inoculați placa de agar din sânge cu izolate alfa-hemolitice suspectate.
• se aplică discuri de optochină disponibile în comerț pe placa de agar din sânge cu dungi
• se incubează plăcile la 37 CTC cu 5-10% CO2 timp de 18-24 ore.

observați zona de inhibare a creșterii în jurul discului și interpretați ca:

• o dimensiune a zonei> 14mm indică susceptibilitatea care este diagnosticul Streptococcus pneumoniae.
• coloniile alfa-hemolitice cu o zonă de inhibare cuprinsă între 9 și 13 mm trebuie testate pentru solubilitatea bilei.

B. testul de solubilitate a bilei.

• coloniile alfa-hemolitice care prezintă o zonă de inhibare în jurul discului optochin între 9 și 13 mm trebuie testate pentru solubilitatea bilei.
• se prepară 1,0 ml de suspensie salină a organismului din placa de agar din sânge. Turbiditatea suspensiei trebuie să fie echivalentă cu standardul de 0,5 McFarland.
  

  

• inoculați 0,5 ml suspensie în două tuburi.
• se adaugă o cantitate egală (0,5 ml) de deoxicolat de sodiu 2% într-o eprubetă marcată ca test și 0,5 ml de soluție salină în a doua eprubetă marcată ca martor.
• se agită ușor și se incubează tuburile la 37 XQC timp de 2 ore.

lectură

• reacție pozitivă: Îndepărtarea tubului sau pierderea turbidității în prezența deoxicolatului datorită perturbării celulelor.
• reacție negativă: persistența turbidității.

Notă: Acest test se poate face și direct pe colonie și colonia este lizată prin adăugarea de soluție biliară.

interpretarea testului de solubilitate a Optochinei și bilei

• inhibarea zonei de creștere în jurul optochinei 14mm este cu siguranță pneumococi.
• o zonă de inhibare definită în jurul discului optochin< 14mm și dacă izolatul este solubil în bilă, izolatul este considerat Streptococcus pneumoniae (dacă nu este solubil în bilă, nu este Streptococcus pneumoniae).Mneomonics: amintiți-vă propoziția „Streptococcus pneumoniae este un șef”adică tulpini solubile în bilă, sensibile la Optochină
• cu < 14 mm zonă de inhibare a optochinei sau nicio zonă și izolatul nu este solubil în bilă, nu este pneumococi. Este probabil Streptococcus viridans.

sensibilitate antimicrobiană

• efectuați testul de sensibilitate antimicrobiană împotriva unui grup selectat de antimicrobiene prin metoda difuziei discului

raportarea rezultatelor: Streptococcus pneumoniae izolate și modele de rezistență cu antibiotice testate

detectarea antigenului

antigenul c-carbohidrat al Streptococcus pneumoniae poate fi detectat în urină (citiți:testarea antigenului urinar pneumococic (UAT): principiu, procedură și rezultate ) pentru diagnosticul pneumonie și în LCR pentru diagnosticul meningitei pneumococice.