proteină recombinantă de suprafață exterioară a (des – Cys1-OspA) din boala Lyme spirochete Borrelia burgdorferi: niveluri ridicate de producție în culturile de drojdie Saccharomyces cerevisiae

proteina recombinantă de suprafață exterioară a cu o formă trunchiată N-terminală (des-Cys1-OspA) din spirocheta bolii Lyme Borrelia burgdorferi a fost exprimată în Saccharomyces cerevisiae la niveluri ridicate de producție. Deoarece vaccinul candidat recombinant exprimat în Escherichia coli prezintă randamente de producție scăzute și purificarea lipoproteinelor pare dificilă, am investigat secreția unui OspA recombinant solubil în drojdia S. cerevisiae. În acest fel, un derivat Leu+ al S. cerevisiae cI3ABYS86 a fost utilizat ca tulpină gazdă transformată cu o plasmidă de Expresie care conține gena care codifică des-Cys1-OspA și condusă de promotorul MF alpha 1. Rezultatele culturii Fed-lot au arătat că se obține o secreție eficientă de des-Cys1-OspA cu un nivel ridicat de producție de aproximativ 2.1 g l – 1 la o densitate celulară de 101 G L-1 greutate uscată a celulei. Acumularea de proteine recombinante în supernatant depășește 6% din totalul proteinelor din drojdie atunci când este estimată prin electroforeza în gel a dodecil sulfatului de sodiu/poliacrilamidei. Mai mult, des-Cys1-OspA a prezentat solubilități mai mici la densități celulare ridicate și, în consecință, a precipitat o fracțiune din proteina recombinantă. De asemenea, a fost detectată o scindare internă a precursorului MF alpha 1 pro::des-cys1-OspA. Cu toate acestea, în acest caz, scindarea a avut loc la o frecvență astfel încât cantitățile mari de des-Cys1-OspA secretate ar putea fi utilizate pentru evaluarea unui efect imunogen asupra imunizării animalelor. Aceste studii vor extinde cunoștințele despre utilitatea OspA ca vaccin pentru borrelioza Lyme.