How to identify Streptococcus pneumoniae?

Streptococcus pneumoniae (pneumococci) is a part of the normal nasopharyngeal and oropharyngeal flora. It is an important etiological agent of upper and lower respiratory tract infections (URTI and LRTI), bacteremia and septicemia. Streptococcus pneumoniae is also associated with otitis media, sinusitis, meningitis and endocarditis.

pneumokokit ovat grampositiivisia Lancetin muotoisia diplokokkeja (solunsisäisiä tai solunulkoisia), ei-liikkuvia ja kapseloituja. Ne esiintyvät pareittain laajemman Pää vastakkain, minkä vuoksi niitä kutsutaan Grampositiivisiksi diplokokeiksi. S. pneumoniae on nirso bakteeri, joka kasvaa parhaiten 35-37°C: n lämpötilassa ~5% CO2 (tai kynttiläpurkissa).

laboratoriodiagnoosi

Streptococcus pneumoniae-infektion laboratoriodiagnoosi perustuu organismin muodon löytämiseen ysköksestä, tyypilliseen pesäkemorfologiaan, biokemiallisiin reaktioihin, herkkyyteen tietyille diagnostisille levyille ja lateksiagglutinaatiotestiin.

viljely ja tunnistaminen epäillyn Streptococcus pneumoniae-infektion aikana

1. Microscopy and Staining

• Perform Gram staining of the sample (sputum/CSF)
• Gram staining shows Gram positive lanceolate shaped diplococci

Culture and Sensitivity

• 

• Inoculate sample onto blood agar and chocolate agar plate.
• inkuboidaan 37°C: ssa 5 – 10% CO2: n kanssa 24-48 tuntia.

Pesäkemorfologia

• Veriagarilevyn pesäkkeet ovat pieniä (0, 5 mm), pyöreitä, translusenttisia tai limaisia, ja niissä esiintyy alfa-hemolyysiä (agar: n vihreä värjäytyminen pesäkkeiden ympärillä). Alfa-hemolyyttinen ominaisuus erottaa S. pneumoniae-bakteerin monista lajeista, mutta ei yhteismitallisista alfa-hemolyyttisistä (viridans) streptokokeista.
• nuoret alfahemolyyttiset pesäkkeet näkyvät koholla, ja 24-48 tunnin kuluttua pesäkkeet ovat litistyneitä, joissa on painunut keskusta ja sitä kutsutaan draughtsman-yhdyskunnaksi. Se johtuu osittaisesta autolyysistä (nämä pesäkkeet on alustavasti tunnistettu Pneumokokeiksi).
• Streptococcus viridans tuottaa myös alfa-hemolyyttisiä pesäkkeitä, mutta ei draughstman-pesäkettä.

Alfahemolyyttiset pesäkkeet tunnistetaan edelleen seuraavilla varmistuskokeilla.

Streptococcus pneumoniae-bakteerin tunnistaminen biokemiallisten reaktioiden avulla.

A. Optochin-testi (6 mm Kiekko, 5µg).

• Inokuloi veren agar-levy alfa-hemolyyttisiksi epäillyillä isolaateilla.
• Levitä kaupallisesti saatavilla olevat optokiinilevyt veriagarilevylle
• inkuboi levyjä 37°C: ssa 5-10% CO2: n kanssa 18-24 tuntia.

tarkkaile kasvun estovyöhykettä kiekon ympärillä ja tulkitse näin:

• a zone size > 14mm ilmaisee herkkyyden, joka on Streptococcus pneumoniae-bakteerin diagnostinen.
• alfahemolyyttiset pesäkkeet, joiden inhibitioalue on 9-13 mm, on testattava sappiliukoisuuden varalta.

B. Sappiliukoisuustesti.

• alfahemolyyttiset pesäkkeet, joissa optokiinilevyn ympärillä on 9-13 mm: n inhibitioalue, on testattava sappi-liukoisuuden varalta.
• valmista 1, 0 ml eliön suolaliuossuspensiota veren agar-levystä. Jousituksen sameuden tulisi vastata 0,5 McFarland-standardia.
  

  

lukema

• positiivinen reaktio: Putken tyhjentyminen tai sameuden häviäminen deoksikolaatin läsnä ollessa solujen hajoamisen vuoksi.
• negatiivinen reaktio: sameuden pysyvyys.

huomautus: Tämä testi voidaan tehdä myös suoraan pesäkkeeseen ja pesäke lysytetään lisäämällä siihen sappiliuosta.

Optokiini-ja Sappiliukoisuustestin tulkinta

• optokiini 14mm: n ympärillä tapahtuvan kasvun estyminen on ehdottomasti pneumokokki.
• optochin disc: n ympärillä oleva määräinen inhibitioalue < 14mm ja jos isolaatti on sappiliukoinen, isolaattia pidetään Streptococcus pneumoniae: na (jos se ei ole sappiliukoinen, se ei ole Streptococcus pneumoniae).Mneomonics: muista lause ”Streptococcus pneumoniae is a BOSS” eli Sappiliukoiset, Optokiiniherkät
• kannat, joiden < 14 mm estovyöhyke optokiinille tai ei vyöhykettä ollenkaan ja isolaatti ei ole sappiliukoinen se ei ole pneumokokki. Se on luultavasti Streptococcus viridans.

Mikrobilääkeherkkyys

• tee mikrobilääkeherkkyystesti valikoidulle mikrobilääkeryhmälle levydiffuusiomenetelmällä

tulosten raportointi: Streptococcus pneumoniae eristetty ja resistenssimallit testatuilla antibiooteilla

antigeenin osoittaminen

Streptococcus pneumoniae-bakteerin C-hiilihydraattiantigeenit voidaan havaita virtsasta (Lue:pneumokokin Virtsatieteen Antigeenitestaus (UAT): periaate, menettely ja tulokset ) keuhkokuume ja aivo-selkäydinnesteessä pneumokokin aiheuttaman aivokalvontulehduksen diagnosointiin.