MRSA-detektio

metisilliiniresistentti Staphylococcus aureus (MRSA)-detektio-ja tunnistusmenetelmät

avainkohdat

metisilliiniresistentti Staphylococcus aureus (MRSA) raportoitiin ensimmäisen kerran 1960-luvun alussa, ja sitä pidetään nykyään maailmanlaajuisesti merkittävänä sairaaloiden hankkimana taudinaiheuttajana. Termiä metisilliiniresistentti käytetään perinteisesti kuvaamaan resistenssiä mille tahansa tämän luokan mikrobilääkkeille. Tänään Yhdysvalloissa n. 35% S. aureuksen sairaalakannoista on resistenttejä metisilliinille (tai muille penisilliiniantibiooteille), ja viime vuosina vankomysiinille resistentin S. aureuksen (VRSA) ilmaantuminen on aiheuttanut lisähuolta.

resistenssi syntyy, kun eliössä on Meca-geeni, joka tuottaa muunneltua penisilliiniä sitovaa proteiinia, PBP2a: ta (tunnetaan myös nimellä PBP2′) ja joko oksasilliinimikrofoni on 2 mg/l tai metisilliinimikrofoni on 4 mg / l.

infektoituneet ja kolonisoituneet potilaat ovat MRSA: n varastona sekä sairaaloissa että yhteisössä, ja tartunta tapahtuu yleensä terveydenhuollon työntekijöiden välityksellä.

tehokas, nopea laboratoriodiagnoosi ja herkkyystestaus ovat kriittisiä MRSA-infektioiden hoidossa, hallinnassa ja ehkäisyssä.

Detektiomenetelmät

MRSA: n laboratoriotestaus on monimutkainen tasapaino tuloksen nopeuden, herkkyyden, spesifisyyden ja kustannusten välillä.

nykyisin suurin osa seulonnoista tehdään levypohjaisilla menetelmillä. Tutkimusten mukaan tämän menetelmäryhmän osuus on >90% tehdyistä seulontatesteistä.

kuitenkin yhä useammin käytetään useita vaihtoehtoisia menetelmiä, kuten liemipohjaisia menetelmiä, kromogeenisia väliaineita, nopeita seulontasarjoja, molekyylimäärityksiä ja automatisoituja järjestelmiä. Eristäminen seulontapyyhkeistä voi olla pitkä toimenpide, koska ei-steriileistä paikoista otetuissa pyyhkäisynäytteissä on paljon ”kontaminoivia” organismeja.

liemipohjaisia väkevöintivälineitä käytetään yleisesti herkkyyden lisäämiseksi. Tämä tapahtuu kuitenkin tuloksen nopeuden kustannuksella. NaCl lisätään yleensä perusliemeen yhdessä joko metisilliinin, oksasilliinin, kefoksitiinin kanssa. Indikaattoriyhdisteillä voidaan myös antaa varhainen merkki MRSA: n esiintymisestä.

kiinteä Agar-elatusaine: MRSA: n seulomiseen ja eristämiseen kiinteää agar-elatusainetta käyttäen ei ole olemassa yleismaailmallisia standardoituja menetelmiä. Monet selektiiviset tiedotusvälineet ovat saatavilla, ja nämä luottavat inhibiittoreihin, kuten NaCl: ään ja/tai antibiootteihin, jotka auttavat valinnassa yhdessä pH-indikaattorin kanssa korostamaan oletuksia. Esimerkkejä ovat mannitoli suola-Agar, joka sisältää 7% NaCl: ää joko 4 mg/L metisilliiniä tai 2 mg/L oksasilliinia; Oksasilliiniresistentti seulonta-Agar, jossa on 5, 5% NaCl: ää ja 2 mg/L oksasilliinia; Baird Parker Medium, jossa on 8 mg/L siprofloksasiinia; Mueller Hinton Agar, jossa on 4% NaCl: ää ja 6 mg/L oksasilliinia. Herkkyys 24 tunnin inkubaatiossa vaihtelee, ja 48 tunnin inkubaatio vaaditaan usein hyväksyttävään tulokseen.

äskettäin kehitetyissä kromogeenisissa väliaineissa yhdistyvät primaarinen kasvu ja selektiivisyys sekä erilaistuminen koagulaasinegatiivisista stafylokokeista. Nämä tiedotusvälineet osoittavat parempaa erityisyyttä verrattuna perinteisiin tiedotusvälineisiin. Myös herkkyys paranee, mutta vaatii 48 tunnin inkubaation >85%.

suurin osa MRSA: n osoittamiseen käytettävistä molekyylimenetelmistä on sisäisiä, ja ne perustuvat multipleksoituihin PCR-alukkeisiin,jotka havaitsevat S. aureukselle spesifisiä geenejä (nuc, fem) ja mecA toteavat metisilliiniresistenssiä. Useimmat soveltuvat käytettäväksi vain puhtaissa viljelmissä eikä pyyhkäisynäytteiden seulomiseen, koska niissä on koagulaasinegatiivisia stafylokokkeja, joilla on metisilliiniresistentti geeni mecA. Uudemmat kaupallisesti saatavilla olevat amplifikaatiomääritykset, joissa mecA on kohdistettu muihin spesifisiin merkkiaineisiin, kuten koagulaasiin, ja jotka ovat osoittaneet rohkaisevia tuloksia

Bioluminesenssissa on tapahtunut useita muutoksia, erityisesti adenylaattikinaasin (AK) käyttö, entsyymi, jota esiintyy kaikissa ADP: stä ATP: tä tuottavissa soluissa. AK-mittaus on herkempi kuin ATP-pohjaiset järjestelmät ja mahdollistaa rutiininomaisen 50 eliön tai useamman havaitsemisen näytteestä. Varhaiset suoritustiedot osoittavat tulokset, jotka vastaavat tavanomaisia levyviljelymenetelmiä, mutta tulokset saadaan 5 tunnin kuluessa.

tunnistus/vahvistus

perinteisesti S. aureuksen varmistus tehdään slide-koagulaasitestillä (klumping factor) ja putkikoagulaasitestillä (free koagulase). Liukukoagulaasitestin positiiviset tulokset on vahvistettava putkikoagulaasitestillä. Myös dnase-medialevyjä voidaan käyttää, mutta positiiviset vaativat lisävahvistusta.

Agglutinaatiopakkauksia on laajalti saatavilla, ja niitä voidaan käyttää S. aureuksen vahvistamiseen toteamalla proteiini A: ta ja paakkuuntumistekijää, joskin joissakin MRSA: n kannoissa näitä proteiineja on vähän. Uudemmat sarjat toimivat nyt myös havaitsemalla pinta-antigeenia. Muut lateksisarjat havaitsevat pbp2a: n, joka esiintyy solukalvossa ja vaatii solujen lyysin havaitsemiseksi.

saatavilla on laaja valikoima kaupallisia biokemiallisia pakkauksia, sekä manuaalisia että automatisoituja. Nämä perustuvat joukko biokemiallisia testejä antaa Profiilin arvioidaan tietokantoja/taulukoita. Monissa automatisoiduissa järjestelmissä yhdistetään S. aureuksen biokemiallinen tunnistaminen antibioottiherkkyyspaneeleihin MRSA: n vahvistamiseksi.

Antibioottiherkkyysmenetelmät

metisilliinin ja oksasilliinin herkkyystestausmenetelmät ovat laajoja, ja julkaistut tiedot ovat ristiriitaisia suositusten suhteen.

ei ole olemassa yhtä menetelmää, joka soveltuisi kaikkiin MRSA-kantoihin. Standardimenetelmiä julkaisee British Society for Antimicrobial Chemotherapy (bsac) ja Yhdysvalloissa Clinical Laboratory Standards Institute (CLSI), joka tunnettiin aiemmin nimellä NCCLS.

laimennusmenetelmän pienin Estopitoisuus on perinteisesti ollut vertailumenetelmä.

BSAC suosittelee Mueller Hintonin tai Columbia agarin käyttöä 2% NaCl: lla ja 104 pmy/ml inokulaatilla inkuboituna 30°C: ssa.CLSI suosittelee Mueller Hinton agaria 2% NaCl: lla ja 104 pmy/ml inokulaatilla inkuboituna 33-35°C: ssa.

molekyylimenetelmät, jotka havaitsevat mecA-geenin, korvaavat MIC: n vertailumenetelmänä.

antibioottien herkkyystestaus levydiffuusiomenetelmillä on edelleen yleisimmin käytetty, mutta tuloksiin vaikuttavat useat tekijät, kuten väliaine, NaCl-pitoisuus, lämpötila, inokulaatti ja testiaine.

useat viimeaikaiset tutkimukset, joissa käytettiin kefoksitiinilevyn diffuusiomenetelmää, viittaavat suurempaan luotettavuuteen kuin oksasilliinillä. Erityistä väliainetta tai inkubaatiolämpötilaa ei tarvita, ja penisillinaasin hyper-tuottajat vaikuttavat testiin vähemmän.

tuorein CLSI-lisäosa (M100-S14) viittaa 30µg: n kefoksitiinilevyjen käyttöön käyttäen raja-arvoa <= 19mm osoituksena S. aureuksen oksasilliiniresistenssistä. Muita väliainepohjaisia menetelmiä ovat agar, liemipohjaiset breakpoint-menetelmät (2 mg/L oksasilliinia, 4 mg/L metisilliiniä) ja CLSI: n suosittelemat agar-seulontamenetelmät (hyväksytty standardi M7-A6).

MRSA ei ole enää vain sairaaloissa hankittu infektio , vaikka se on edelleen ensisijainen tartuntalähde.

yhä useammin MRSA: ta voi hankkia yhteisössä ja jopa lemmikeiltä . Tämä on ehkä huolestuttavampi suuntaus, joka johtuu mahdollisesti suuresta isäntäväestöstä, ja siinä korostetaan tarvetta lisätä huomattavasti antibioottien käytön ja käytön valvontaa.

antibioottien laajamittainen toimittaminen muihin kuin kliinisesti merkittäviin käyttötarkoituksiin voi johtaa vain suurempiin antibioottipitoisuuksiin vastustuskykyisten organismien valikoitumiseen.

määritelmät: Mitä ovat ESKAPEPATOGEENIT?

mediassa käytetään usein nimityksiä ”superbugs”, ESKAPIPATOGEENIT (Enterococcus faecium, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae, Acinetobacter baumannii, Pseudomonas aeruginosa, Enterobacter spp.) pidetään johtava syy sairaalainfektioiden maailmanlaajuisesti.

saat uusimmat päivitykset nopeisiin mikrobiologisiin testimenetelmiin lähetettyä sähköpostiisi? Tilaa ilmainen rapidmicrobiology eNewsletter