How to identify Streptococcus pneumoniae?

Streptococcus pneumoniae (pneumococci) is a part of the normal nasopharyngeal and oropharyngeal flora. It is an important etiological agent of upper and lower respiratory tract infections (URTI and LRTI), bacteremia and septicemia. Streptococcus pneumoniae is also associated with otitis media, sinusitis, meningitis and endocarditis.

Pneumokokken sind grampositive lanzettenförmige Diplokokken (intrazellulär oder extrazellulär), unbeweglich und eingekapselt. Sie treten paarweise mit den breiteren Endokokken auf und werden daher als grampositive Diplokokken bezeichnet. S. pneumoniae ist ein anspruchsvolles Bakterium, das am besten bei 35-37 ° C mit ~ 5% CO2 (oder in einem Kerzenglas) wächst.

Labordiagnostik

Die Labordiagnostik der Streptococcus pneumoniae-Infektion basiert auf dem Auffinden Merkmale Form des Organismus im Sputum, charakteristische Koloniemorphologie, biochemische Reaktionen, Anfälligkeit für bestimmte diagnostische Tests und Latex-Agglutinationstest.

Kultur und Identifizierung bei Verdacht auf eine Streptococcus pneumoniae-Infektion

1. Microscopy and Staining

• Perform Gram staining of the sample (sputum/CSF)
• Gram staining shows Gram positive lanceolate shaped diplococci

Culture and Sensitivity

• 

• Inoculate sample onto blood agar and chocolate agar plate.
• 24 – 48 Stunden bei 37°C mit 5-10% CO2 inkubieren.

Kolonieform

• Die Kolonien auf der Blutagarplatte sind klein (0,5 mm), rund, transluzent oder schleimig mit Alpha-Hämolyse (Eine grüne Verfärbung des Agars um die Kolonien herum). Alpha-hämolytische Eigenschaft unterscheidet S. pneumoniae von vielen Arten, aber nicht von den kommensalen alpha-hämolytischen (viridans) Streptokokken.
• Junge alpha-hämolytische Kolonien erscheinen erhöht, und in 24 – 48 Stunden Kolonien sind mit depressiven Zentrum abgeflacht und heißt Zeichner Kolonie. Es ist auf partielle Autolyse zurückzuführen (diese Kolonien werden vorläufig als Pneumokokken identifiziert). Streptococcus viridans produziert auch alpha-hämolytische Kolonien, aber keine Draughstman-Kolonie.

Alpha-hämolytische Kolonien werden durch die folgenden Bestätigungstests weiter identifiziert.

Identifizierung von Streptococcus pneumoniae durch biochemische Reaktionen.

A. Optochin-Test (6 mm Scheibe mit 5µg).

• Blutagarplatte mit vermuteten alpha-hämolytischen Isolaten inokulieren.
• Handelsübliche Optochin-Scheiben auf die gestreifte Blutagarplatte auftragen
• Platten bei 37°C mit 5-10% CO2 für 18-24 Stunden inkubieren.

Beobachten Sie die Zone der Wachstumshemmung um die Scheibe herum und interpretieren Sie sie als:

• Eine Zonengröße > 14mm zeigt die Empfindlichkeit an, die für Streptococcus pneumoniae diagnostisch ist.
• Alpha-hämolytische Kolonien mit einer Hemmzone zwischen 9 und 13 mm sollten auf Gallenlöslichkeit getestet werden.

B. Gallenlöslichkeitstest.

• Alpha-hämolytische Kolonien, die eine Hemmzone um die Optochinonscheibe zwischen 9 und 13 mm aufweisen, sollten auf Gallenlöslichkeit getestet werden.
• Bereiten Sie 1,0 ml Kochsalzlösung Suspension des Organismus aus Blutagarplatte. Die Trübung der Suspension sollte 0,5 McFarland-Standard entsprechen.
  

  

• Inoculate 0,5 ml die Suspension in zwei Röhren.
• Geben Sie eine gleiche Menge (0,5 ml) 2% iges Natriumdeoxycholat in ein als Test gekennzeichnetes Röhrchen und 0,5 ml Kochsalzlösung in das zweite als Kontrolle gekennzeichnete Röhrchen.
• Leicht schütteln und die Röhrchen 2 Stunden bei 37°C inkubieren.

Lesen

• Positive Reaktion: Clearing der Röhre oder Verlust der Trübung in Gegenwart von Desoxycholat aufgrund der Störung der Zellen.
• Negative Reaktion: Persistenz der Trübung.

Hinweis: Dieser Test kann auch direkt an der Kolonie durchgeführt werden und die Kolonie wird durch Zugabe von Gallenlösung lysiert.

Interpretation des Optochin- und Gallenlöslichkeitstests

• Die Zonenhemmung des Wachstums um Optochin 14mm ist definitiv Pneumokokken.
• Eine bestimmte Hemmzone um die Optochinscheibe < 14 mm und wenn das Isolat gallenlöslich ist, wird das Isolat als Streptococcus pneumoniae betrachtet (Wenn es nicht gallenlöslich ist, ist es nicht Streptococcus pneumoniae).Mneomonics: Denken Sie an den Satz „Streptococcus pneumoniae ist ein BOSS“, dh Gallenlösliche, Optochin-empfindliche
• Stämme mit < 14 mm Hemmzone gegenüber Optochin oder überhaupt keine Zone und das Isolat ist nicht gallenlöslich Es sind keine Pneumokokken. Es ist wahrscheinlich Streptococcus viridans.

Antimikrobielle Empfindlichkeit

• Durchführung eines antimikrobiellen Empfindlichkeitstests gegen eine ausgewählte Gruppe von antimikrobiellen Mitteln durch Scheibendiffusionsmethode

Ergebnisberichterstattung: Streptococcus pneumoniae isoliert und Resistenzmuster mit getesteten Antibiotika

Nachweis des Antigens

C-Kohlenhydrat-Antigen des Streptococcus pneumoniae kann im Urin nachgewiesen werden (Lesen Sie:Pneumococcus Urinary Antigen Testing (UAT): Prinzip, Verfahren und Ergebnisse ) zur Diagnose von Pneumonie und im Liquor zur Diagnose von Pneumokokken-Meningitis.