How to identify Streptococcus pneumoniae?

Streptococcus pneumoniae (pneumococci) is a part of the normal nasopharyngeal and oropharyngeal flora. It is an important etiological agent of upper and lower respiratory tract infections (URTI and LRTI), bacteremia and septicemia. Streptococcus pneumoniae is also associated with otitis media, sinusitis, meningitis and endocarditis.

pneumokokken zijn grampositieve lancetvormige diplokokken (intracellulair of extracellulair), niet-beweeglijk en ingekapseld. Ze komen voor in paren met het bredere eind tegenovergesteld, vandaar genoemd grampositieve diplokokken. S. pneumoniae is een veeleisende bacterie, die het beste groeit bij 35-37°C met ~5% CO2 (of in een kaarsenpot).

laboratoriumdiagnose

laboratoriumdiagnose van Streptococcus pneumoniae-infectie is gebaseerd op het vinden van kenmerken vorm van het organisme in het sputum, karakteristieke koloniemorfologie, biochemische reacties, gevoeligheid voor bepaalde diagnostische schijven en latexagglutinatietest.

Culture and identification during suspected Streptococcus pneumoniae infection

1. Microscopy and Staining

• Perform Gram staining of the sample (sputum/CSF)
• Gram staining shows Gram positive lanceolate shaped diplococci

Culture and Sensitivity

• 

• Inoculate sample onto blood agar and chocolate agar plate.incubeer bij 37°C met 5-10% CO2 gedurende 24-48 uur.

Koloniemorfologie

• kolonies op bloedagarplaat zijn klein (0,5 mm), rond, transluscent of slijmvormig met alfa-hemolyse (een groene verkleuring van de agar rond de kolonies). De Alfa-hemolytische eigenschap onderscheidt S. pneumoniae van vele soorten, maar niet van de commensale Alfa-hemolytische (viridans) streptokokken.
• jonge Alfa-hemolytische kolonies verschijnen verhoogd, en in 24 – 48 uur kolonies worden afgeplat met Depressief Centrum en wordt de tekenaar kolonie genoemd. Het is te wijten aan gedeeltelijke autolyse (deze kolonies worden voorlopig geïdentificeerd als pneumokokken).
• Streptococcus viridans produceert ook alfa-hemolytische kolonies, maar produceert geen draughstmankolonie.

Alfa-hemolytische kolonies worden verder geïdentificeerd door de volgende bevestigende tests.

Identificatie van Streptococcus pneumoniae door biochemische reacties.

A. Optochinetest (schijf van 6 mm met 5µg).

• Ent agarplaat in het bloed met vermoedelijke Alfa-hemolytische isolaten.
• breng commercieel verkrijgbare optochineschijven aan op de gestreepte bloedagarplaat
• Incubeerplaten bij 37°C met 5-10% CO2 gedurende 18-24 uur.

observeer de zone van groeiremming rond de schijf en interpreteer als:

• een zone grootte > 14mm duidt op gevoeligheid die diagnostisch is voor Streptococcus pneumoniae.
• Alfa-hemolytische kolonies met een inhibitiezone tussen 9 en 13 mm moeten worden getest op galoplosbaarheid.

B. Galoplosbaarheidstest.

• Alfa-hemolytische kolonies met een remmingszone rond de optochineschijf tussen 9 en 13 mm moeten worden getest op galoplosbaarheid.
• bereid 1,0 ml zoutoplossing van het organisme uit de agarplaat in het bloed. De troebelheid van de suspensie moet gelijk zijn aan 0,5 McFarland standaard.
  

  

• Enten 0,5 ml van de suspensie in twee buizen.
• voeg een gelijke hoeveelheid (0,5 ml) natriumdeoxycholaat van 2% toe in één buis met de aanduiding test en 0,5 ml zoutoplossing in de tweede buis met de aanduiding controle.
• schud zachtjes en incubeer de tubes gedurende 2 uur bij 37°C.

lezen

• positieve reactie: Clearing van de buis of verlies van troebelheid in de aanwezigheid van deoxycholaat als gevolg van verstoring van cellen.
• negatieve reactie: persistentie van troebelheid.

Opmerking: Deze test kan ook direct op de kolonie worden uitgevoerd en de kolonie wordt gelyseerd door toevoeging van galoplossing.

interpretatie van Optochine en Galoplosbaarheidstest

• Zone remming van de groei rond optochine 14mm is beslist pneumokokken.
• een bepaalde remmingszone rond optochineschijf < 14mm en als het isolaat gal oplosbaar is, wordt het isolaat beschouwd als Streptococcus pneumoniae (als het niet gal oplosbaar is, is het geen Streptococcus pneumoniae).Mneomonica: denk aan de zin “Streptococcus pneumoniae is een baas”, d.w.z. gal oplosbaar, Optochine gevoelig
• stammen met < 14 mm remmingszone voor optochine of helemaal geen zone en het isolaat is niet gal oplosbaar het is geen pneumokokken. Het is waarschijnlijk Streptococcus viridans.

de Antimicrobiële gevoeligheid

• Uitvoeren van de antimicrobiële gevoeligheid test tegen een geselecteerde groep van stoffen door disk diffusie-methode

de Rapportage van de resultaten: Streptococcus pneumoniae geïsoleerd en weerstand patronen met de geteste antibiotica

Detectie van antigeen

C-koolhydraten-antigeen van de Streptococcus pneumoniae kan worden gedetecteerd in de urine (Lees:Pneumokokken Urine Antigeen Test (UAT): Principe, de werkwijze en de Resultaten ) voor de diagnose van longontsteking en in de CSF voor de diagnose van pneumokokken meningitis.