MRSA Detectie

Methicilline-Resistente Staphylococcus aureus (MRSA) Detectie en Identificatie Methodes

de Belangrijkste Punten

• Gram +ve coccus
• Druif als clusters van cellen
• kroontjes met ophanghaakjes voor methicilline en andere penicillines
• Kan ook worden aangeduid als ORSA

Methicilline-resistente Staphylococcus aureus (MRSA) waren het eerst gemeld in het begin van de jaren 1960 en worden nu beschouwd als een van de belangrijkste ziekenhuis verworven ziekteverwekker wereldwijd. De term resistent methicilline wordt historisch gebruikt om resistentie tegen een van deze klasse van antimicrobiële stoffen te beschrijven. Vandaag in de VS CA. 35% van de ziekenhuisstammen van S. aureus zijn resistent tegen methicilline (of andere penicillineantibiotica), en in de afgelopen jaren heeft de opkomst van vancomycine-resistente S. aureus (VRSA) extra zorg veroorzaakt.

resistentie treedt op wanneer het organisme een mecA-gen heeft dat een veranderd penicillinebindend eiwit produceert, PBP2a (ook bekend als PBP2′) en een oxacillinemicrofoon van 2 mg/l of een methicillinemicrofoon van 4 mg/l.

geïnfecteerde en gekoloniseerde patiënten vormen het reservoir van MRSA, zowel in ziekenhuizen als in de Gemeenschap, waarbij de overdracht meestal plaatsvindt via contact met gezondheidswerkers.

effectieve, snelle laboratoriumdiagnose en gevoeligheidstesten zijn cruciaal voor de behandeling, beheersing en preventie van MRSA-infecties.

detectietechnieken

Laboratoriumscreening voor MRSA is een complexe balans tussen resultaatsnelheid, gevoeligheid, specificiteit en kosten.

momenteel wordt het grootste deel van de screening uitgevoerd met behulp van plaatgebaseerde methoden. Uit enquêtes blijkt dat deze methodologische groep verantwoordelijk is voor >90% van de uitgevoerde screeningtests.

Er wordt echter steeds meer gebruik gemaakt van een aantal alternatieve methoden, waaronder op bouillon gebaseerde methoden, chromogene media, snelle screenings kits, moleculaire assays en geautomatiseerde systemen. De isolatie uit de screeningswabs kan een langdurige procedure zijn, vanwege het aantal “verontreinigende” organismen dat aanwezig is in de wabs van niet-steriele plaatsen.

verrijkingsmedia op basis van bouillon worden vaak gebruikt om de gevoeligheid te verhogen. Dit gaat echter ten koste van de snelheid van het resultaat. NaCl wordt over het algemeen toegevoegd aan de basisbouillon samen met ofwel methicilline, oxacilline, cefoxitine. Indicatorverbindingen kunnen ook worden gebruikt om een vroege indicatie van de aanwezigheid van MRSA te geven.

vaste Agar Media: er zijn geen universele gestandaardiseerde methoden voor screening en isolatie van MRSA met behulp van vaste agar media. Vele selectieve media zijn beschikbaar, en deze baseren zich op inhibitors zoals NaCl en/of antibiotica om selectie, samen met een pH-indicator te helpen presumptives te markeren. Voorbeelden zijn Mannitol Zoutagar met 7% NaCl met 4 mg/l methicilline of 2 mg/l oxacilline; Oxacilline resistente Screening Agar met 5,5% NaCl en 2mg/l oxacilline; Baird Parker Medium met 8mg / l ciprofloxacine; Mueller Hinton Agar met 4% NaCl en 6mg/l oxacilline. De gevoeligheid bij 24hrs incubatie is variabel met 48hrs incubatie vaak vereist voor een aanvaardbaar resultaat.

recent ontwikkelde chromogene media combineren primaire groei en selectiviteit met differentiatie van coagulasenegatieve stafylokokken. Deze media tonen verbeterde specificiteit in vergelijking met traditionele media. De gevoeligheid is ook verbeterd, maar vereist 48 uur incubatie om >85% te bereiken.

De meeste moleculaire methoden die worden gebruikt voor de detectie van MRSA zijn intern, gebaseerd op multiplexed PCR primers die genen detecteren specifiek voor S. aureus (nuc,fem) en mecA die methicilline resistentie detecteren. De meeste zijn alleen geschikt voor gebruik met zuivere culturen en niet screening van swabs vanwege de aanwezigheid van coagulase negatieve stafylokokken die het methicilline resistente gen mecA dragen. Nieuwere commercieel verkrijgbare amplificatietesten gericht op mecA in combinatie met andere specifieke markers zoals coagulase en hebben bemoedigende resultaten aangetoond

Er zijn een aantal ontwikkelingen geweest met bioluminescentie, in het bijzonder het gebruik van adenylaatkinase (AK), een enzym dat wordt aangetroffen in alle cellen die ATP uit ADP produceren. AK-meting is gevoeliger dan ATP-gebaseerde systemen en maakt routinematige detectie van 50 organismen of meer in een monster mogelijk. Vroege prestatiegegevens tonen resultaten die gelijkwaardig zijn aan conventionele plaatkweekmethoden, terwijl ze binnen 5 uur resultaten opleveren.

identificatie/bevestiging

traditioneel wordt bevestiging van S. aureus uitgevoerd met behulp van de dia coagulasetest (klonteringsfactor) en de tube coagulasetest (vrije coagulase). Positieve resultaten bij de coagulasetest op het objectglaasje moeten met de coagulasetest op de buis worden bevestigd. DNase media platen kunnen ook worden gebruikt, maar positieven vereisen extra bevestiging.

Agglutinatiekits zijn op grote schaal beschikbaar en kunnen worden gebruikt om S. aureus te bevestigen door proteïne A en klonteringsfactor te detecteren, hoewel sommige stammen van MRSA lage concentraties van deze eiwitten hebben. Nieuwere kits werken nu door ook oppervlakteantigeen te detecteren. Andere latexuitrustingen ontdekken PBP2a die binnen het celmembraan voorkomt en lysis van de cellen voor opsporing vereist.

een breed scala aan commerciële biochemische kits is beschikbaar, zowel handmatig als geautomatiseerd. Deze zijn gebaseerd op een serie biochemische tests die een profiel geven dat tegen databases/tabellen wordt beoordeeld. Vele geautomatiseerde systemen combineren biochemische identificatie van goudhoudende S. met antibiotische gevoeligheidspanelen voor de bevestiging van MRSA.

Antibioticagevoeligheidsmethoden

methoden voor het testen van de gevoeligheid voor methicilline en oxacilline zijn uitgebreid en de gepubliceerde gegevens zijn tegenstrijdig met de aanbevelingen.

Er is geen enkele methode die geschikt is voor alle MRSA-stammen. Standaardmethoden worden gepubliceerd door de British Society for Antimicrobial Chemotherapy (BSAC) en in de VS door het Clinical Laboratory Standards Institute (CLSI), voorheen bekend als NCCLS.

minimale remmende concentratie bij de verdunningsmethode is van oudsher de referentiemethode.

BSAC beveelt het gebruik aan van Mueller Hinton of Columbia agar met 2% NaCl en 104 cfu/ml geïncubeerd entmateriaal bij 30°C. CLSI adviseert Mueller Hinton Agar met 2% NaCl en 104 cfu/ml geïncubeerd entmateriaal bij 33-35°C.

moleculaire methoden die het Meca-gen detecteren vervangen MIC als referentiemethode.

antibioticagevoeligheidstests met schijfdiffusiemethoden blijven het meest gebruikt, maar de resultaten worden beïnvloed door een reeks factoren zoals medium, NaCl-concentratie, temperatuur, entmateriaal en testmiddel.

een aantal recente studies waarbij gebruik werd gemaakt van de cefoxitineschijfdiffusiemethode wijzen op een grotere betrouwbaarheid dan met oxacilline. Er is geen speciale medium-of incubatietemperatuur nodig en de test wordt minder beïnvloed door hyper-producenten van penicillinase.

het meest recente clsi-supplement (M100-S14) suggereert het gebruik van 30 µg cefoxitineschijven met een breekpunt van <= 19mm als indicatie voor resistentie van S. aureus tegen oxacilline. Andere media gebaseerde methoden omvatten agar, bouillon gebaseerde breekpunt methoden (2mg / l oxacilline, 4mg / l methicilline) en agar screening methoden aanbevolen door CLSI (goedgekeurde standaard M7-A6).

MRSA is niet langer alleen een infectie die in ziekenhuizen wordt opgelopen , hoewel dit een primaire bron van transmissie blijft.

in toenemende mate kan MRSA worden verkregen in de Gemeenschap en zelfs van huisdieren . Dit is misschien de zorgwekkender trend vanwege de potentieel grote gastheerpopulatie en benadrukt de noodzaak van aanzienlijk meer controle op hoe en wanneer antibiotica worden gebruikt.wijdverspreide toediening van antibiotica buiten klinisch significant gebruik kan alleen leiden tot verdere selectie van organismen die resistent zijn voor hogere antibioticaconcentraties.

definities: wat zijn eskape pathogenen?

in de media vaak aangeduid als ‘superbugs’, de eskape pathogenen (Enterococcus faecium, Staphylococcus aureus ,Klebsiella pneumoniae, Acinetobacter baumannii, Pseudomonas aeruginosa, Enterobacter spp.) worden beschouwd als de belangrijkste oorzaak van ziekenhuis verworven infecties wereldwijd.

ontvang de laatste updates van snelle microbiologische testmethoden naar uw e-mail? Abonneer u op de gratis rapidmicrobiology eNewsletter