Recombinant-outer-surface protein A (des-Cys1-OspA) van de ziekte van Lyme spirocheet Borrelia burgdorferi: hoge productie in de gist Saccharomyces cerevisiae culturen

De recombinant-outer-surface protein A met een N-terminaal gereduceerde vorm (des-Cys1-OspA) van de ziekte van Lyme spirocheet Borrelia burgdorferi werd uitgedrukt in Saccharomyces cerevisiae bij hoge productieniveaus. Aangezien de kandidaat voor recombinant vaccin, uitgedrukt in Escherichia coli, lage productieopbrengsten vertoont en de zuivering van lipoproteïnen moeilijk blijkt te zijn, hebben we de secretie van een oplosbaar recombinant OSPA in de gist S. cerevisiae onderzocht. Op deze manier werd een Leu+-derivaat van S. cerevisiae cI3ABYS86 gebruikt als gastheerstam getransformeerd met een expressieplasmide dat het gen bevat dat codeert voor des-Cys1-OspA en aangedreven wordt door de MF alpha 1-promotor. Uit de resultaten van de fed-batch kweek bleek dat een efficiënte secretie van des-Cys1-OspA wordt verkregen bij een hoge productie van ongeveer 2.1 g L-1 bij een celdichtheid van 101 G L-1-cel drooggewicht. De accumulatie van recombinant eiwit in het supernatans groter is dan 6% van de totale gistproteïnen, berekend met behulp van natriumdodecylsulfaat/polyacrylamidegelelektroforese. Bovendien toonde des-Cys1-OspA lagere oplosbaarheden bij hoge celdichtheden en, als gevolg daarvan, een fractie van het recombinante eiwit neergeslagen. Een interne splitsing van de MF alpha 1 pro::des-Cys1-OSPA precursor werd ook gedetecteerd. In dit geval vond de splitsing echter plaats met een zodanige frequentie dat de grote hoeveelheden van de afgescheiden des-Cys1-OspA konden worden gebruikt voor de evaluatie van een immunogeen effect op de immunisatie van dieren. Deze studies zullen de kennis van het nut van OspA als vaccin voor Lyme borreliose uitbreiden.