Rekombinantes Außenoberflächenprotein A (des-Cys1-OspA) aus der Lyme-Borreliose-Spirochäten Borrelia burgdorferi: hohe Produktionsmengen in Saccharomyces cerevisiae Hefekulturen

Das rekombinante Außenoberflächenprotein A mit einer erhöhten Konzentration an Saccharomyces cerevisiae Hefekulturen N-terminal abgeschnittene Form (des-Cys1-OspA) aus der Lyme-Borreliose Spirochäten Borrelia burgdorferi wurde in Saccharomyces cerevisiae bei hoher Produktion exprimiert. Da der in Escherichia coli exprimierte rekombinante Impfstoffkandidat geringe Produktionsausbeuten aufweist und die Aufreinigung von Lipoproteinen schwierig erscheint, haben wir die Sekretion eines löslichen rekombinanten OspA in der Hefe S. cerevisiae untersucht. Auf diese Weise wurde ein Leu + -Derivat von S. cerevisiae cI3ABYS86 als Wirtsstamm verwendet, der mit einem Expressionsplasmid transformiert wurde, das das für des-Cys1-OspA kodierende Gen enthielt und vom MF alpha 1-Promotor angetrieben wurde. Die Fed-Batch-Kulturergebnisse zeigten, dass eine effiziente Sekretion von des-Cys1-OspA mit einem hohen Produktionsniveau von etwa erhalten wird 2.1 g l-1 bei einer Zelldichte von 101 g l-1 Zelltrockengewicht. Die Akkumulation von rekombinantem Protein im Überstand übersteigt 6% der gesamten Hefeproteine, wenn sie durch Natriumdodecylsulfat / Polyacrylamid-Gelelektrophorese geschätzt wird. Darüber hinaus zeigte des-Cys1-OspA geringere Löslichkeiten bei hohen Zelldichten und als Folge davon fiel ein Teil des rekombinanten Proteins aus. Eine interne Spaltung des MF alpha 1 pro::des-Cys1-OspA-Vorläufers wurde ebenfalls nachgewiesen. In diesem Fall erfolgte die Spaltung jedoch mit einer solchen Häufigkeit, dass die großen Mengen des sekretierten des-Cys1-OspA zur Beurteilung einer immunogenen Wirkung auf die Tierimmunisierung eingesetzt werden konnten. Diese Studien werden das Wissen über die Nützlichkeit von OspA als Impfstoff gegen Lyme-Borreliose erweitern.