Il controllo sopra il vostro Cre ricombinasi esperimenti
Cre Ricombinasi Gesicles
- Flox vostre cellule su richiesta
- Vedere più veloce e più efficiente di ricombinazione
- Semplificare esperimenti con un rapido, facile protocollo
- Ridurre al minimo involontaria eventi di ricombinazione
che Cosa succede se si aveva il controllo completo sopra il vostro ricombinasi esperimenti? Cre Gesicles ricombinasi darvi questo controllo e molto altro ancora. Come potente strumento per la modifica genomica senza l’uso di acidi nucleici, la tecnologia gesicle migliora la consegna della ricombinasi alle cellule bersaglio con aggiornamenti sia nella facilità d’uso che nella flessibilità sperimentale. Si prega di visitare la nostra nota tecnica per ulteriori dati.
Che cosa sono i gesicles di ricombinasi di Cre?
La ricombinasi Cre è una ricombinasi site-specific isolata dal batteriofago P1 che catalizza la ricombinazione tra due siti loxP a 34 bp. È ampiamente usato per knockout e knockin studi: la sequenza di DNA situata tra due ripetizioni tandem di siti loxP può essere asportata per creare un mutante di delezione, o un plasmide contenente un singolo sito loxP può subire l’integrazione site-specific in un genoma contenente loxP per creare un mutante di inserimento.
I gesicles della ricombinasi di Cre sono nanovesicles cellulare-derivati che contengono la proteina concentrata della ricombinasi di Cre. Quando applicati alle cellule bersaglio, si fondono con la membrana plasmatica e scaricano la ricombinasi Cre attiva nella cellula, dove esegue la ricombinazione Cre-mediata tra i siti loxP. Non è presente alcun gene codificante per la ricombinasi Cre. Pertanto, non vi è alcun rischio di espressione di ricombinasi sostenuta nelle cellule e la possibilità di eventi di ricombinazione non intenzionali è ridotta al minimo.
Applicazioni per la Cre Ricombinasi Gesicles includono:
- Consegna della ricombinasi Cre per knockout e knockin studi
- la Limitazione e il controllo di ricombinazione sito-specifica di eventi, tra cui delezioni, inserzioni, traslocazioni e inversioni
Cre Ricombinasi Gesicles consegnare Cre ricombinasi di proteine per ogni cellula di mammifero rapidamente, in modo efficiente, e senza acidi nucleici.
In che modo i gesicles migliorano gli esperimenti di ricombinasi Cre?
La tecnologia Gesicle apre la strada a una vasta gamma di possibilità sperimentali, con caratteristiche chiave che fanno risparmiare tempo e offrono prestazioni senza pari.
| Benefits of Cre Recombinase Gesicles | |
| Feature | Advantage |
| Simple protocol: just apply 10–20 µl of the gesicles to target cells. | Easier to use than plasmid or viral gene delivery. No preparation or pretreatment required. |
| Compatible with most cell types. | Funziona bene con la divisione e la non divisione delle cellule, delle cellule primarie e delle linee cellulari. La bassa tossicità mantiene la vitalità cellulare meglio di altri metodi di trasfezione. |
| La proteina è presente e attiva non appena i gesicoli vengono applicati alle cellule. | Consegna efficiente e alta attività di ricombinasi Cre. Nessun ritardo per la trascrizione e la traduzione. |
| Nessun gene codificante Cre ricombinasi presente. | Nessun rischio di espressione di ricombinasi Cre sostenuta nelle cellule. Eventi di ricombinazione indesiderati limitati. |
| I gesicles sono etichettati con proteina fluorescente rossa CherryPicker. | Facile visualizzazione della consegna alle cellule. |
Il test LACZ reporter di seguito confronta direttamente due metodi di consegna della ricombinasi Cre: trasfezione plasmidica e gesicles. In questo esempio, l’espressione di lacZ è possibile solo quando il codone di stop a monte affiancato da loxP è stato asportato dall’attività della ricombinasi. L’utilizzo di gesicles ha comportato un’escissione più rapida ed efficiente rispetto alla consegna della trasfezione plasmidica della Cre ricombinasi.
Modifica rapida ed efficiente del genoma utilizzando Gesicles ricombinasi Cre. Una linea cellulare che ospitava una cassetta di espressione lacZ integrata, condizionale loxP (pannello superiore) è stata trasfettata con un plasmide che esprime la ricombinasi Cre (pannello inferiore, immagine centrale) o trattata con Gesicles di ricombinasi Cre (pannello inferiore, immagine destra). 24 ore dopo il trattamento, le cellule sono state colorate per l’espressione di LacZ utilizzando il kit di colorazione beta-galattosidasi.