Kontrolli Cre-rekombinaasikokeissa
Cre Rekombinaasi Gesicles
- Flox solusi tarvittaessa
- näe nopeampi, tehokkaampi rekombinaatio
- yksinkertaistaa kokeita nopealla, helpolla protokollalla
- minimoi tahattomat rekombinaatiotapahtumat
Mitä jos sinulla olisi täysi kontrolli rekombinaasikokeissa? Cre Recombinase Gesicles antaa sinulle tämän hallinnan ja paljon muuta. Gesicle-tekniikka on tehokas työkalu genomimuokkaukseen ilman nukleiinihappoja, ja se parantaa rekombinaasin toimitusta kohdesoluihin sekä helppokäyttöisyyden että kokeellisen joustavuuden päivityksillä. Käy tekninen huomautus lisätietoja.
Mitä ovat Cre Rekombinaasi Gesicles?
Cre-rekombinaasi on P1-bakteriofagista eristetty paikkasidonnainen rekombinaasi, joka katalysoi rekombinaatiota kahden 34-bp loxP-alueen välillä. Sitä käytetään laajalti knockout-ja knockin-tutkimuksissa: LOXP-alueiden kahden tandem-toiston välissä oleva DNA-sekvenssi voidaan poistaa deleetiomutantin luomiseksi tai plasmidi, joka sisältää yhden loxP-alueen, voi läpikäydä paikkasidonnaisen integraation loxP: tä sisältävään genomiin insertiomutantin luomiseksi.
Cre-Rekombinaasigesikkelit ovat solupohjaisia nanovesikkeleitä, jotka sisältävät väkevää Cre-rekombinaasiproteiinia. Kohdesoluihin kohdistettuna ne sulautuvat plasman kalvoon ja erittävät aktiivista Cre-rekombinaasia soluun, jossa se suorittaa kreevälitteisen rekombinaation loxP-alueiden välillä. Cre-rekombinaasia koodaavaa geeniä ei ole. Näin ollen soluissa ei esiinny jatkuvaa rekombinaasiekspressiota ja tahattomien rekombinaatiotapahtumien mahdollisuus on mahdollisimman pieni.
Cre Rekombinase Gesicles-sovelluksia ovat:
- Cre rekombinaasin toimittaminen knockout-ja knockin-tutkimuksiin
- paikkakohtaisten rekombinaatiotapahtumien rajoittaminen ja kontrollointi, mukaan lukien poistot, insertiot, translokaatiot ja inversiot
Cre Rekombinase Gesicles toimittaa Cre rekombinaasiproteiinin nopeasti mihin tahansa nisäkässoluun tehokkaasti ja ilman nukleiinihappoja.
miten gesicles parantaa Cre-rekombinaasikokeita?
Gesicle-tekniikka tasoittaa tietä monenlaisille kokeellisille mahdollisuuksille, joiden keskeiset ominaisuudet säästävät aikaa ja tarjoavat vertaansa vailla olevan suorituskyvyn.
| Benefits of Cre Recombinase Gesicles | |
| Feature | Advantage |
| Simple protocol: just apply 10–20 µl of the gesicles to target cells. | Easier to use than plasmid or viral gene delivery. No preparation or pretreatment required. |
| Compatible with most cell types. | toimii hyvin jakautuvien ja jakamattomien solujen, primaarisolujen ja solulinjojen kanssa. Alhainen toksisuus ylläpitää solujen elinkykyä paremmin kuin muut verensiirtomenetelmät. |
| proteiini on läsnä ja aktiivinen heti, kun gesikkeleitä levitetään soluihin. | tehokas toimitus ja korkea Cre-rekombinaasin aktiivisuus. Ei viivettä transkriptioon ja kääntämiseen. |
| Cre-rekombinaasia koodaavaa geeniä ei esiinny. | pitkäkestoisen Cre-rekombinaasiekspression riskiä soluissa ei ole. Rajalliset tahattomat rekombinaatiotapahtumat. |
| Gesikkelit on merkitty Cherrypickerin punaisella fluoresoivalla proteiinilla. | helppo visualisointi solusuorituksesta. |
alla olevassa LacZ reporter-määrityksessä verrataan suoraan kahta Cre-rekombinaasin annostelumenetelmää: plasmidisiirtoa ja gesikleitä. Tässä esimerkissä lacZ: n ilmentyminen on mahdollista vain silloin, kun loxp-sivuinen stop-kodoni ylävirtaan erotettiin rekombinaasiaktiivisuudella. Elesuikaleiden käyttö johti Cre-rekombinaasin nopeampaan ja tehokkaampaan poistoon kuin plasmidisiirto.
nopea ja tehokas genomin muokkaus käyttäen Cre-Rekombinaasigesikleitä. Solulinja, jossa on integroitu, loxp-ehdollinen lacZ-lausekekasetti (yläpaneeli), joko transfektoitiin kre-rekombinaasia ilmentävällä plasmidilla (alapaneeli, keskimmäinen kuva) tai käsiteltiin Cre-Rekombinaasigesikkeleillä (alapaneeli, oikea kuva). 24 tuntia hoidon jälkeen solut värjättiin LacZ-ilmentymistä varten Beta-galaktosidaasi-Värjäyssarjan avulla.