Kontrola nad eksperymentami rekombinazy Cre
gesty rekombinazy Cre
- Flox komórki na żądanie
- Zobacz szybszą, bardziej wydajną rekombinację
- Uprość eksperymenty dzięki szybkiemu i łatwemu protokołowi
- Minimalizuj niezamierzone zdarzenia rekombinacji
Co jeśli masz pełną kontrolę nad eksperymentami rekombinacji? Gestykulacje Cre Recombinase dają Ci tę kontrolę i wiele więcej. Jako potężne narzędzie do modyfikacji genomu bez użycia kwasów nukleinowych, technologia gesicle poprawia dostarczanie rekombinazy do komórek docelowych z ulepszeniami zarówno pod względem łatwości użycia, jak i elastyczności eksperymentalnej. Odwiedź naszą notatkę techniczną, aby uzyskać więcej danych.
co to są kredy?
rekombinaza Cre jest swoistą rekombinazą wyizolowaną z bakteriofagu P1, która katalizuje rekombinację między dwoma miejscami loxP o długości 34 bp. Jest szeroko stosowany w badaniach knockout i knockin: sekwencja DNA zlokalizowana pomiędzy dwoma tandemowymi powtórzeniami miejsc loxP może zostać wycięta w celu wytworzenia mutanta delecyjnego, lub plazmid zawierający pojedyncze miejsce loxP może zostać poddany specyficznej integracji z genomem zawierającym loxP w celu wytworzenia mutanta insercyjnego.
Cre Recombinase Gesicles to pochodzące z komórek nanovesicles zawierające skoncentrowane białko rekombinazy Cre. Po nałożeniu na komórki docelowe łączą się one z błoną plazmatyczną i odprowadzają aktywną rekombinazę Cre do komórki, gdzie przeprowadza rekombinację za pośrednictwem Cre między miejscami loxP. Brak genu kodującego rekombinazę. Tak więc, nie ma ryzyka trwałej ekspresji rekombinazy w komórkach, a prawdopodobieństwo niezamierzonych zdarzeń rekombinacji jest zminimalizowane.
zastosowania Gesicles rekombinazy Cre obejmują:
- dostarczanie rekombinazy Cre do badań knockout i knockin
- ograniczenie i kontrola specyficznych dla miejsca zdarzeń rekombinacji, w tym delecji, insercji, translokacji i inwersji
Gesicles rekombinazy Cre szybko dostarczają białko rekombinazy Cre do dowolnej komórki ssaków, wydajnie i bez kwasów nukleinowych.
Jak usprawnić eksperymenty kreatynowe?
Technologia Gesicle toruje drogę dla szerokiej gamy możliwości eksperymentalnych, z kluczowymi funkcjami, które oszczędzają czas i oferują niezrównaną wydajność.
| Benefits of Cre Recombinase Gesicles | |
| Feature | Advantage |
| Simple protocol: just apply 10–20 µl of the gesicles to target cells. | Easier to use than plasmid or viral gene delivery. No preparation or pretreatment required. |
| Compatible with most cell types. | działa dobrze z dzielącymi i nierozdzielającymi się komórkami, komórkami pierwotnymi i liniami komórkowymi. Niska toksyczność utrzymuje żywotność komórek lepiej niż inne metody transfekcji. |
| białko jest obecne i aktywne zaraz po nałożeniu na komórki. | Wydajna dostawa i wysoka aktywność rekombinazy Cre. Brak opóźnień w transkrypcji i tłumaczeniu. |
| brak genu kodującego rekombinazę. | brak ryzyka trwałej ekspresji rekombinazy Cre w komórkach. Ograniczone niezamierzone zdarzenia rekombinacji. |
| łatwa wizualizacja dostarczania do komórek. | |
poniższy test reporterowy LacZ bezpośrednio porównuje dwie metody dostarczania rekombinazy Cre: transfekcję plazmidu i gesicles. W tym przykładzie ekspresja lacZ jest możliwa tylko wtedy, gdy kodon stop flankowany loxp został wycięty przez aktywność rekombinazy. Zastosowanie gesicles skutkowało szybszym i skuteczniejszym wycięciem niż transfekcja plazmidowa dostarczania rekombinazy Cre.
szybka i skuteczna modyfikacja genomu za pomocą rekombinazy Cre. Linię komórkową zawierającą zintegrowaną, warunkową kasetę ekspresyjną Lacz (górny panel) transfekowano plazmidem wyrażającym rekombinazę Cre (dolny panel, środkowy obraz) lub traktowano gestami rekombinazy Cre (dolny panel, prawy obraz). 24 godziny po leczeniu komórki barwiono w celu uzyskania ekspresji LacZ za pomocą zestawu do barwienia Beta-galaktozydazy.