Kontrolle über Ihre Cre-Rekombinase-Experimente
Cre-Rekombinase-Vesikel
- Floxen Sie Ihre Zellen bei Bedarf
- Sehen Sie eine schnellere, effizientere Rekombination
- Vereinfachen Sie Experimente mit einem schnellen, einfachen Protokoll
- Minimieren Sie unbeabsichtigte Rekombinationsereignisse
Was wäre, wenn Sie die volle Kontrolle über Ihre Rekombinase-Experimente hätten? Cre-Rekombinase-Vesikel geben Ihnen diese Kontrolle und vieles mehr. Als leistungsstarkes Werkzeug für die genomische Modifikation ohne den Einsatz von Nukleinsäuren verbessert die Gesicle-Technologie die Rekombinase-Abgabe an Zielzellen mit Verbesserungen in Bezug auf Benutzerfreundlichkeit und experimentelle Flexibilität. Bitte besuchen Sie unsere Tech Note für weitere Daten.
Was sind Cre-Rekombinase-Vesikel?
Cre-Rekombinase ist eine aus dem P1-Bakteriophagen isolierte ortsspezifische Rekombinase, die die Rekombination zwischen zwei 34-bp-loxP-Stellen katalysiert. Es ist weit verbreitet für Knockout- und Knockin-Studien: die DNA-Sequenz, die sich zwischen zwei Tandem-Wiederholungen von loxP-Stellen befindet, kann herausgeschnitten werden, um eine Deletionsmutante zu erzeugen, oder ein Plasmid, das eine einzelne loxP-Stelle enthält, kann eine ortsspezifische Integration in ein Genom, das loxP enthält, erfahren, um eine Insertionsmutante zu erzeugen.
Cre-Rekombinase-Vesikel sind von Zellen abgeleitete Nanovesikel, die konzentriertes Cre-Rekombinase-Protein enthalten. Wenn sie auf Ihre Zielzellen aufgetragen werden, verschmelzen sie mit der Plasmamembran und entladen aktive Cre-Rekombinase in die Zelle, wo sie eine Cre-vermittelte Rekombination zwischen loxP-Stellen durchführt. Es ist kein Cre-Rekombinase-kodierendes Gen vorhanden. Somit besteht kein Risiko einer anhaltenden Rekombinase-Expression in Ihren Zellen, und die Wahrscheinlichkeit unbeabsichtigter Rekombinationsereignisse wird minimiert.
Anwendungen für Cre-Rekombinase-Gesikel umfassen:
- Abgabe von Cre-Rekombinase für Knockout- und Knockin-Studien
- Begrenzung und Kontrolle von ortsspezifischen Rekombinationsereignissen, einschließlich Deletionen, Insertionen, Translokationen und Inversionen
Cre-Rekombinase-Gesikel liefern Cre-Rekombinase-Protein an jede Säugetierzelle schnell, effizient und ohne Nukleinsäuren.
Wie verbessern Vesikel Cre-Rekombinase-Experimente?
Die Gesicle-Technologie ebnet den Weg für eine Vielzahl von experimentellen Möglichkeiten mit wichtigen Funktionen, die Zeit sparen und unübertroffene Leistung bieten.
| Benefits of Cre Recombinase Gesicles | |
| Feature | Advantage |
| Simple protocol: just apply 10–20 µl of the gesicles to target cells. | Easier to use than plasmid or viral gene delivery. No preparation or pretreatment required. |
| Compatible with most cell types. | Funktioniert gut mit teilenden und nicht teilenden Zellen, Primärzellen und Zelllinien. Geringe Toxizität erhält die Lebensfähigkeit der Zellen besser als andere Transfektionsmethoden. |
| Protein ist vorhanden und aktiv, sobald Vesikel auf Zellen aufgebracht werden. | Effiziente Abgabe und hohe Aktivität der Cre-Rekombinase. Keine Verzögerung für Transkription und Übersetzung. |
| Kein Cre-Rekombinase-kodierendes Gen vorhanden. | Kein Risiko einer anhaltenden Cre-Rekombinase-Expression in Zellen. Begrenzte unbeabsichtigte Rekombinationsereignisse. |
| Vesikel sind mit CherryPicker rot fluoreszierendem Protein markiert. | Einfache Visualisierung der Lieferung an Zellen. |
Der folgende lacZ-Reporterassay vergleicht direkt zwei Cre-Rekombinase-Verabreichungsmethoden: Plasmidtransfektion und Gesikel. In diesem Beispiel ist die Expression von lacZ nur möglich, wenn das stromaufwärts loxP-flankierte Stopcodon durch Rekombinaseaktivität exzidiert wurde. Die Verwendung von Vesikeln führte zu einer schnelleren und effizienteren Exzision als die Plasmidtransfektion Lieferung von Cre-Rekombinase.
Schnelle und effiziente Genommodifikation mit Cre-Rekombinase Gesicles. Eine Zelllinie mit einer integrierten, loxP-bedingten lacZ-Expressionskassette (oben) wurde entweder mit einem Plasmid transfiziert, das Cre-Rekombinase exprimiert (unten, mittleres Bild), oder mit Cre-Rekombinase-Vesikeln behandelt (unten, rechtes Bild). 24 Stunden nach der Behandlung wurden die Zellen mit dem Beta-Galactosidase-Färbekit auf lacZ-Expression angefärbt.